论文总字数：21213字

摘 要

实验目的 探讨eNOS在慢性间歇低氧(CIH)对小鼠血管内皮功能障碍的影响机制，以及抗氧剂是否可以逆转OSAS所致动脉内皮功能障碍，为OSAS的治疗提供理论依据。

实验方法 首先建立的慢性间歇低氧（CIH）小鼠模型，采用ELISA的方法检测小鼠血清里边NO的水平，并利用Western-Blotting的方法测的小鼠主动脉的eNOS和p-eNOS的变化。并利用RT-PCR的方法检测小鼠脑组织ET-1指标的变化从而得到内皮功能的相关改变。

实验结果 结果表明CIH组的NO水平、eNOS的活性均有所下降，而NAC干预组以上指标均有所上升。

结论 随着间歇低氧时间的延长,小鼠血清 NO 水平和 eNOS 活性逐渐下降，动脉内皮结功能障碍。而抗氧剂在一定程度上可以逆转内皮功能障碍。

关键词 阻塞性睡眠呼吸综合征 内皮型一氧化氮合酶 一氧化氮 一氧化氮合酶

The study of eNOS in chronic intermittent hypoxia-induced arterial endothelial dysfunction of the regulatory mechanism

Abstract

Objective Discussion the mechanism of eNOS in Chronic Intermittent Hypoxia induced endothelial dysfunction in mice,and whether antioxidants can reverse artery endothelial dysfunction induced by OSAS.And it can provide a theoretical basis for the treatment of OSAS.

Method Firstly we establish Chronic Intermittent Hypoxia(CIH) mouse model. Then,using the ELISA method to detect the NO levels inside the serum and using the Western-Blotting method to measure the change of eNOS in mouse aorta.Finally,we use RT-PCR to detect ET-1 in mice brain and we can know the changes in endothelial function from changes in ET-1.

Result The result showed the level of NO and the activity of eNOS in CIH group has declined. While the NAC group has risen of above indicators.

Conclusion The CIH mouse displayed lower serum NO levels and eNOS activity. The antioxidant can be to some extent endothelial dysfunction.

Key words Obstructive Sleep Apnea Syndrome; Endothelial nitric oxide synthase;nitric oxide, nitric oxide synthase.

目 录

中文摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1睡眠呼吸暂停综合症多系统损害的表现 1

1.1.1 OSAS与心血管 1

1.1.2 OSAS与脑血管 2

1.1.3 OSAS与糖代谢 2

1.1.4 OSAS与脂代谢 2

1.1.5 OSAS与消化系统 3

1.1.6 OSAS与其他呼吸疾病 3

1.1.7 OSAS与妊娠 4

1.1.8 OSAS的其他损害 4

1.2血管内皮的功能及损伤机制 4

1.2.1 血管内皮的功能 4

1.2.2血管内皮功能障碍 5

1.2.3 OSAS致血管内皮功能障碍的损失机制 5

第二章 实验 8

2.1 材料与仪器 8

2.1.1实验动物 8

2.1.2实验气体 8

2.1.3主要试剂 8

2.1.4主要仪器 8

2.2间歇低氧模型的建立 9

2.2.1小鼠的饲养及分组 9

2.2.2实验标本的留取 9

2.3测定血清NO的含量 9

2.4测定小鼠主动脉eNOS的变化 10

2.4.1细胞膜蛋白的抽提 10

2.4.2 BCA蛋白浓度测定 11

2.4.3利用Western测eNOS的变化 11

2.5小鼠大脑的ET-1的变化检测 13

2.5.1 RNA的提取 13

2.5.2 RT-PCR 13

第三章 结果与讨论 16

3.1 各组小鼠血清中NO含量的变化 16

3.2各组小鼠主动脉eNOS活性的变化 16

3.3 小鼠大脑的ET-1的含量变化 18

第四章 结论与展望 20

4.1结论 20

4.2展望 20

参考文献 21

致谢 23

第一章 文献综述

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(Obstructive Sleep Apnea Syndrome,OSAS)也被称为阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(Obstructive Sleep Apnea-hyponea syndrome, OSAHS)。它是一种常见的发病率较高的慢性睡眠呼吸疾病并存在有潜在致死性。OSAS的病理损伤的核心因素是：体内长期存在的低氧/再氧的环境(Hypoxia/Re-oxyg- enation, H/ROX)^[1]，从而导致了血管内皮功能障碍。血管内皮功能障碍的主要表现为内皮细胞分泌的血管活性物质失调，这些活性物质主要包括：一氧化氮(NO)、能促进血管内皮细胞自身生长的血管内皮生长因子(VEGF)及内皮素(ET)^[2]。 OSAS模式的间歇低氧(intermittent hypoxia,IH)具有很鲜明的特点：一就是低氧程度较严重，最低的PaO₂可达到20～30mmHg；二是IH频率较高，一般患者的IH频率可达到每小时20次以上；三是血氧的变化幅度大并且发生非常迅速，在低血氧和正常血氧之间波动；四是病程相当漫长，长年的睡眠过程中暴露于间歇低氧中^[3]。IH不同于持续低氧的另一个区别是存在低氧之后的正常氧间期，而重度低氧之后的正常氧间期则会加重机体发生过氧化的损害。国外资料表明，OSAS在成年人中的患病概率是4%^[4]，并且在发病率上男性高于女性，而且随着年龄的增加会呈上升的趋势。有调查的结果显示，未进行治疗的OSAS患者在5年之内病死率可达到11%～13%。因此，OSAS已经成为了一个越来越普遍的世界级公共健康的问题并引起各国学者的广泛的关注^[5,6]。

1.1睡眠呼吸暂停综合症多系统损害的表现

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