论文总字数：19150字

摘 要

目的：观察花生四烯酸对小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖和分化的影响。 方法：将MC3T3-E1细胞按5×10⁵个/mL接种在含10% FBS、100U/mL青霉素和链霉素的α-MEM培养基中，37℃、5% CO₂ 温育。细胞为长梭形贴壁生长，每2～3d传代1次，取对数生长期细胞用于实验。实验分为4组，分别为正常对照组和不同浓度（30，60,120μmol/L）花生四烯酸加药组。MTT法观察花生四烯酸对成骨细胞的增殖作用，通过检测骨碱性磷酸酶活性、骨钙素的表达及矿化结节情况，考察花生四烯酸对成骨细胞增殖、分化的影响，并通过RT-PCR技术检测相关信号通路因子的表达，考察花生四烯酸的作用通路。

结果：浓度为30，60,120μmol/L的花生四烯酸能够促进成骨细胞的增殖和分化。

结论:中浓度和高浓度的花生四烯酸可以有效地促进成骨细胞的分化，高浓度的AA可以加速成骨细胞的增殖，促进骨形成。

关键词：花生四烯酸 成骨细胞 增殖 分化

The effect of the Arachidonic acid on osteoblast OPG/RANKL/RANK system

Abstract

Objective：To observe the effect of the arachidonic acid on proliferation and differentiation of MC3T3-E1 osteoblast cell .

Methods: The MC3T3-E1 cells were inoculated in medium containing 10% FBS,100U/mL penicillin and streptomycin in α-MEM at 5×10⁵/mL .Fusiform cells grew adhesive, passaging once every 2 to 3 days and logarithmic growth phase cells used in the experiment.They were divided into four groups,including control group and arachidonic acid with different concentrations(30,60,120μmol/L). The effect of arachidonic acid on the proliferation of osteoblast cells was observed by MTT method.

Result: A concentration of 30,60,120 μmol/L arachidonic acid can significantly promote the proliferation and differentiation of the arachidonic acid on human osteoblast cell. By detecting the activity of bone alkaline phosphatase, the expression of osteocalcin and mineralized nodules ,to study the effect of arachidonic acid on proliferation and differentiation of the osteoblast cell, and detecting the expression of related signaling pathways factors by RT-PCR technique to investigated the role of arachidonic acid pathway.

Conclusion: The arachidonic acid can promote the proliferation and differentiation of osteoblast, which may be related to increasing osteoblast cell.

Keywords: the arachidonic acid ；osteoblasts；proliferation ；differentiation

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 绪论 1

1.1 国内外对骨质疏松研究背景 1

1.2成骨细胞介绍 2

1.2.1 成骨细胞起源 2

1.2.2 成骨细胞来源谱系种类别 2

1.2.3 成骨细胞发展阶段 2

1.2.4骨质疏松病理机制 3

1.2.5 骨钙素 3

1.3成骨细胞OPG/RANK/RANKL信号系统的组成 3

1.3.1 RANK/RANKL信号系统 4

1.3.2 骨保护素（OPG） 4

1.4 骨质疏松的药物治疗 4

1.4.1激素代替疗法 5

1.4.2 选择性雌激素受体调节剂 5

1.4.3 二磷酸盐类 5

1.4.4 降钙素 5

1.4.5 维生素D和钙 6

1.4.6氟化物 6

1.4.7 新型药物花生四烯酸的治疗 6

1.5 本课题的主要内容和技术路线 6

第二章 材料和方法 8

2.1材料与仪器 8

2.1.1主要试剂 8

2.1.2主要仪器设备 8

2.2实验方法 9

2.2.1 MTT法 9

2.2.2 ALP活性检测 9

2.2.3骨钙素免疫荧光检测 10

2.2.4茜素红染色 11

2.2.5 RT-PCR方法 12

2.3 数据处理及统计分析 13

2.4 结果与讨论 13

2.4.1 MTT 法检测各AA对成骨细胞增殖的影响 13

2.4.2 碱性磷酸酶活性检测 14

2.4.3骨钙素免疫荧光检测 15

2.4.4茜素红染色法 15

2.2.5 RT-PCR法： 16

参考文献 17

致 谢 20

绪论

1.1 国内外对骨质疏松研究背景

骨质疏松症在世界常见病、多发病中位居第7位，目前骨质疏松症患者已超过9000万，即每14人中有1人患病，绝经后妇女的发病率更高^[1]。由骨质疏松引发的骨折不仅给患者造成身心痛苦，而且给社会造成巨大的经济负担。因此骨质疏松症的预防和治疗势在必行。骨代谢包括骨合成和骨吸收两个过程。该过程受到很多因素的影响，如遗传、营养、环境、性别及内分泌等都是关键调节因素等都是关键调节因素^[2]。

骨质疏松症是一种以骨量减少,骨密度降低、骨组织微结发生改变致骨骼脆性和骨折危险性增高为特征的全身性骨骼疾病^[3]。骨量减少包括骨矿物质和骨基质等比例减少，是骨代谢改变的一种结果。在骨质疏松症的形成和发展中，必然伴随着骨代谢生化标志物的变化。这种变化不仅可 以反映骨吸收与骨形成的平衡状况，而且在骨质疏松症早期诊断、临床疗效评价和指导临床用药方面具有重要的价值^[4]。

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