论文总字数：13027字

摘 要

目的 建立HPLC法测定注射用特利加压素在PH4.0、5.0、6.0三种不同PH环境下的有关物质。 方法 采用Waters Symmetry C₁₈ (150×3.0mm，5μm)为色谱柱；以硫酸铵缓冲液（称取硫酸铵3.30g加水至5000ml，加硫酸1ml混匀）-甲醇（1708:292）为流动相A，硫酸铵缓冲液-甲醇（758:242）为流动相B，梯度洗脱；流速为0.6 ml/min；柱温为30℃；检测波长为210nm。结果 本法可将特异性杂质和破坏条件下产生的降解产物与主药较好分离，3种PH环境下冻干制剂因素实验结果表明样品在弱酸性条件下（PH4.0）相对稳定，且3种PH条件下最大单个杂质均为[AC-Gly¹]特利加压素，总杂质均＜5.0%，最大单个杂质均＜1.0%。 结论 所建立的方法专属性强，灵敏度高，重现性好，操作简便，能够有效控制产品质量。

关键词 注射用特利加压素，RP-HPLC法，有关物质，降解产物

The study of the qualification in terlipressin for injection

ABSTRACT

Objective To establish an HPLC method for determining the related substances and decomposition products in terlipressin for injection in three PH conditions (PH4.0, PH5.0, PH6.0). Method An Waters Symmetry C₁₈ (150×3.0mm，5μm) column was used with the mobile phase A of Ammonium sulfate buffer(Weight ammonium sulfate 3.30g add water to 5000ml mixed with 1ml of sulfuric acid)-methanol(1708:292) and mobile phase B of Ammonium sulfate buffer-methanol(758:242)by gradient elution at flow rate of 0.6 ml/min ; the detection wavelength of 210 nm and the column temperature of 30℃. Results The impurities and degradation products from failure condition were well separated from terlipressin. By the comparison of results from lyophilized preparation factor experiment in three PH conditions, the sample was stablest in the weak acid condition (PH4.0) and the impurity [AC-Gly¹] terlipressin is the biggest one, the total content of related substance were lt;0.5%, the biggest impurity content was lt;1.0% in all conditions. Conclusion The method is selective, accurate, reproducible and simple. It is suitable for determination of related compounds in terlipressin.

Keywords terlipressin for injection RP-HPLC related substance decomposition product

目录

摘 要 I

ABSTRACT II

1.前言 1

1.1 绪言 1

1.2药品基本信息 2

1.2.1 化学性质 2

1.2.2药理作用 3

1.2.3适应症 3

1.2.4药代动力学性质 4

1.2.5原料药和注射剂制备方法 4

2. 实验材料 5

2.1 仪器 5

2.2 试剂 5

3. 实验方法与结果 5

3.1 色谱条件 5

3.2 有关物质方法学研究 6

3.2.1干扰试验 6

3.2.2 破坏性试验 7

3.2.3 检测限 9

3.2.4 进样精密度及样品溶液稳定性 9

3.3 制剂处方摸索相关物质研究 10

3.3.1冻干前后制剂样品PH及相关物质的测定 10

3.3.2 因素5、10天制剂样品PH及相关物质的测定 10

3.4 有关物质测定结果 11

4.分析与讨论 12

4.1 影响冻干制剂稳定性的因素 12

4.2 冻干保护剂的选择及其保护机制 12

参考文献 14

致谢 16

1.前言

1.1 绪言

多肽类药物是介于传统的化学药物和大分子药物之间的一种特殊药物，其具有毒副作用低、用量少、生物活性强、疗效好、无代谢异化等特点^[1]。多肽类化合物在自然界广泛存在，与细胞分化、免疫防御、肿瘤病变、抗衰防老、生殖控制、生物钟节律等许多生命活动密切相关，具有很大的利用空间，所以随着多肽的合成和分离技术的发展，越来越多具有药用价值的多肽化合物被运用于药物治疗，而加压素类似物特利加压素就是其中之一。

有关物质是药物在生产和贮藏过程中引入的杂质，包括化学反应的前体，中间体和降解产物^[2]。目前，多肽类药物多采用生化提取、转基因技术和固相合成工艺制备，其工艺特点决定了产物的杂质含量较高^[3]。因此，有关物质检查是控制药品安全性的重要措施。

多肽药物的有关物质一般为生产工艺中带入的肽类相关物质或其降解物和聚合物。 检测方法^[1]大概有三种：1.反相高效液相色谱法。多肽类物质由氨基酸通过肽键连接而成，有一定疏水性，在C18 柱上有一定保留，在反相高效液相色谱中可以有效分离，现在多肽类药物的有关物质检测多采用高效液相色谱法。合成多肽类药物中的有关物质复杂。一般使用梯度洗脱^[2],只有个别使用等度洗脱。有研究认为不可采用纯水相与纯有机相在线梯度混合洗脱，尤其是对水相含盐量较高的流动相，因为色谱系统不稳定，杂质检测容易偏高或偏低^[3]。2.毛细管电泳法。毛细管电泳兼具高压电泳和高效液相色谱法的优点，具有速度快，分辨率高，用量少，操作简便，消耗少等特点,其在杂质分析特别是在多肽蛋白类药物杂质分析中，具有很大的优势^[4]。3.液质联用。采用液质联用进行多肽类药物有关物质的分析时，能在不得到纯杂质的情况下，给出杂质的一级甚至多级质谱信息，从而获得该杂质的分子量和序列信息，为相关肽的定性和结构解析提供依据。不过目前这项技术在国内多肽有关物质检测中应用还较少。

高效液相色谱法(HPLC)是用高压输液泵将规定流动相泵入装有填充柱的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，依次进入检测器，由数据处理系统记录和处理色谱信号。反相色谱系统使用非极性填充剂，常用的色谱填充剂为化学键合硅胶，主要是十八烷基硅烷键合硅胶。反相色谱系统的流动相首选甲醇-水系统，如果检测波长在紫外末端则首选乙腈-水系统。高效液相色谱常用检测器为紫外检测器，包括二极管阵列检测器，其他常用检测器有荧光检测器，蒸发光散射检测器，示差折光检测器，电化学检测器和质谱检测器^[2]。

1.2药品基本信息

特利加压素（terlipressin），学名三苷酰胺基赖氨酸加压素，是一种人工合成抗利尿激素的类似物。抗利尿激素（Antidiuretic Hormone, ADH），又称精氨酸血管加压素（Arginine Vasopressin, AVP）、血管升压素等，是一种多肽激素，在人体中的主要作用是控制尿排出的水量。加压素可以用于 尿崩症、食管静脉曲张出血的治疗，也用于中枢性尿崩症、肾性尿崩症和精神性烦渴的鉴别诊断。但由于它严重的血管副作用在很多国家已不被使用^[5]。而它的类似物特利加压素具有和它相似的作用^[6]，可以减少肝血管压梯度，静脉曲张压和单一器官血流量^[7-8]。特利加压素是一种前药，本身没有活性，在体内经酶代谢生成低浓度加压素产生药效^[9]。注射用的特利加压素多用于胃肠道和泌尿生殖系统的出血等。

1.2.1 化学性质：

1结构式：甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-半胱氨酸-酪氨酸-苯丙氨酸-谷氨酸胺-天冬酰胺-半胱氨酸-脯氨酸-赖氨酸-甘氨酸-氨基

请支付后下载全文，论文总字数：13027字