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摘 要

我们开发了一种快速、特异和灵敏的液相色谱 - 串联质谱（LC-MS-MS）分析方法检测两个结构类似物金丝桃苷和紫云英苷的方法，并将其应用于大鼠口服和静脉注射金丝桃苷与紫云英苷后的药代动力学研究中。质谱采用多反应监测模式进行。该方法金丝桃苷和紫云英苷的线性浓度范围是0.5-200ng/ ml。金丝桃苷和紫云英苷的日内和日间精密度是lt;11.04％，QC相对误差均在7.1％以内。该方法被用来研究口服和静脉注射金丝桃苷（1.39mg/kg)和紫云英苷(0.54mg/kg)纯品的药物动力学研究。金丝桃苷口服给药的T_max(0.250±0)、T_1/2(1.658±0.764)、静脉给药后的T_1/2(0.963±0.291)。紫云英苷口服给药的T_max(0.313±0.125)、T_1/2(0.659±0.056)、静脉给药后的T_1/2(0.522±0.096)。金丝桃苷和紫云英苷的口服生物利用度分别为1.250%、3.606%.

关键字 柱液相色谱 - 串联质谱法.药代动力学.金丝桃.紫云英苷

A Sensitive LC–MS–MS Method for Simultaneous Quantification
of Two Structural Isomers, Hyperoside and Isoquercitrin:
Application to Pharmacokinetic Studies

Abstract

We report the development and validation of arapid, specific, and sensitive liquid chromatographic–tandem mass spectrometric (LC–MS–MS) method for analysisand pharmacokinetic study, in rats, of hyperoside andisoquercitrin, two bioactive structural isomers present inthe leaves of Apocynum venetum L. Themethod was linear over the concentration range 0.5-200 ng mL-1 for both hyperoside and isoquercitrin.Intra-day and inter-day precision for both hyperoside andisoquercitrin were \11.04%, and relative errors were all within 7.1% at all QC levels. The method was used to study the pharmacokinetic performance of the pure of Hyperin and astragalin of Apocynum venetum L.leaves to rats. Hyperin oral administration Tmax is 0.250 ± 0, T_{1 / 2} is 1.658 ± 0.764), After intravenous administration T_{1 / 2} is 0.963 ± 0.291. Astragalin after oral administration Tmax is 0.313 ± 0.125, T_{1 / 2} is 0.659 ± 0.056, After intravenous administration T_{1 / 2} is 0.522 ± 0.096. Hyperoside and oral bioavailability astragalin 1.250%,3.606% respectively.

Keywords Column liquid chromatography–tandem massspectrometry Pharmacokinetics Hyperoside Isoquercitrin

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1紫云英苷和金丝桃苷的基本性质 1

1.2紫云英苷和金丝桃苷的药理及药效作用 1

1.2.1紫云英苷药理作用 1

1.2.1.1抗炎作用 1

1.2.1.2修复受损DNA作用 1

1.2.2金丝桃苷药理作用 2

1.2.2.1镇痛作用 2

1.2.2.2抗氧化作用 2

1.2.2.3对心肌损伤的保护作用 3

1.2.2.4保肝作用 3

1.2.2.5对脑缺血损伤的保护作用------------------------------------------------------------3

1.3药品的检验技术（联用技术） 3

1.4药物代谢动力学的意义 3

1.4.1药物代谢动力学研究在新药发现中应用 4

1.4.2药物代谢动力学在药理学研究中的应用 4

1.4.3药物代谢动力学在制剂学研究中的应用 4

1.4.4药物代谢动力学在中药现代化中的应用 4

1.4.5药物代谢动力学在毒理学研究中的应用 4

1.5 药代动力学参数及其应用 5

1.5.1生物利用度和生物等效性的概念及应用 5

1.6 本论文研究的主要内容和意义------------------------------------------------------------------5

第二章 材料和方法 6

2.1材料与仪器 6

2.1.1主要试剂 6

2.1.2主要仪器 6

2.2标准溶液和质量控制（QC）样本的制备 6

2.3血浆样品预处理 7

2.4仪器和LC-MS/MS分析条件 7

2.5方法学验证 9

2.5.1特异性 9

2.5.2线性和最低定量限（LLOQ） 9

2.5.3提取回收率和基质效应 9

2.5.4精密度和准确度 10

2.5.5稳定性 10

2.5.6稀释和残留效应 10

2.6药代动力学和统计分析 11

第三章 结果与讨论 12

3.1质谱和色谱条件的优化 12

3.2血浆样品预处理 14

3.3方法学验证 14

3.3.1特异性 14

3.3.2标准曲线和LLOQ 16

3.3.3提取回收率和基质效应 16

3.3.4精密度和准确度 17

3.3.5稳定性 18

3.3.6残留效应 19

3.4药代动力学的应用 19

第四章 结论 23

参考文献 24

致谢 28

第一章 文献综述

1.1紫云英苷和金丝桃苷的基本性质

紫云英苷为黄色的针状结晶。熔点175～178℃。旋光度-16.9°(c=0.45,甲醇)。可溶于氢氧化钠溶液、热水、乙醇、乙酸乙酯等溶液中，不溶于乙醚、丙酮、氯仿等这些溶液。植物来源有省沽油科植物野鸦椿[Euscaphis japonica (Thunb.)Dipp.]种子,柿科植物柿树(Diospyros kaki L. f.)等多种植物。动物实验表明具有利胆、利尿、降压、解痉、祛痰、抗生物氧化性质和降低毛细血管通透性的作用。目前国内外已有过关于中药提取物中紫云英苷测方法的一些报道，这其中包括有高效液相色谱法^[1]、液相色谱-串联质谱法^[2,3]。

金丝桃苷为淡黄色针状结晶。熔点227～230℃(分解)。旋光度-83°(c=0.2，吡啶)。易溶于甲醇、乙醇、丙酮及吡啶。金丝桃苷存在范围广泛，主要是存在于各种植物的体内，比如金丝桃科、蔷薇科、桔梗科、唇形科、杜鹃花科、葵科、藤黄科、豆科以及卫矛科等的果实与全草中。也可以通过合成来制备。

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