摘 要

近些年来，白藜芦醇因其对心血管疾病、癌症、抗炎和抗氧化的作用而成为研究热点。本文以虎杖为原料，研究了虎杖中白藜芦醇的提取工艺，确定了白藜芦醇的分析测定方法、最佳提取工艺以及分离纯化条件。具体内容总结如下：

1、确定了白藜芦醇的高效液相色谱检测分析方法。釆用C18色谱柱，以甲醇：水（45:55）体系为流动相等度洗脱，反相高效液相色谱法测定虎杖提取液中白藜芦醇的含量；

2、确定了虎杖中白藜芦醇的最佳提取工艺条件。采用水浴乙醇回流法对虎杖粗粉进行提取，通过单因素试验考察提取时间、提取温度、溶剂用量、溶剂浓度及提取次数五个条件因素对虎杖提取液中白藜芦醇提取率的影响。在此基础上，釆用正交法对虎杖中白藜芦醇的提取工艺进行进一步的优化选择，确定了最佳的提取条件：以10倍量的体积分数为80%的乙醇为溶剂, 在50℃温度水浴中回流提取1h。

3、对虎杖中的白藜芦醇糖苷进行水解。利用酸对对虎杖中的白藜芦醇糖苷进行催化水解，使白藜芦醇的含量从0.56%提高到了0.59%。

4、对虎杖提取液中的白藜芦醇进行了分离和纯化。使用AB-8型大孔吸附树脂对白藜芦醇粗品进行分离纯化，分离纯化后的产品纯度达到了75%。

关键词：白藜芦醇；虎杖；提取；分离纯化；大孔吸附树脂

Abstract

Resveratrol has become a research hotspot in recent years due to its effects on cardiovascular diseases, cancer, anti-inflammatory and anti-oxidation. In this paper, Polygonum cuspidatum was used as raw material to study the extraction process of resveratrol from Polygonum cuspidatum. The analytical method, the optimal extraction process and the separation and purification conditions of resveratrol were determined. The specific content is summarized as follows:
1. The HPLC method for the determination of resveratrol was determined. Using C18 column, methanol: water (45:55) system was used to elute the sample with equal flow. Reversed-phase high performance liquid chromatography was used to determine the content of resveratrol in Polygonum cuspidatum extract.

2. The optimum extraction conditions of resveratrol in Polygonum cuspidatum were determined. The water-bath ethanol reflux method was used to extract the crude powder of Polygonum cuspidatum, and the effects of extraction time, extraction temperature, solvent dosage, solvent concentration and extraction times on the extraction rate of resveratrol in Polygonum cuspidatum extract were investigated by single factor experiments. On this basis, the extraction process of resveratrol from Polygonum cuspidatum was further optimized by orthogonal method to determine the best extraction conditions: 10 times the volume fraction of 80% ethanol as the solvent, 50 °C temperature water bath reflux extraction 1h.

3. Hydrolyze resveratrol glycosides in Polygonum cuspidatum. The acid hydrolysis of resveratrol glycosides in Polygonum cuspidatum increased the resveratrol content from 0.56% to 0.59%.

4. The resveratrol in Polygonum cuspidatum extract was isolated and purified. The crude resveratrol was isolated and purified using AB-8 macroporous adsorption resin. The purity of the purified product reached 75%.

Key Words：Resveratrol; Polygonum Cuspidatum ; Extraction; Separation and purification; Macroporous adsorption resins

目 录

第1章 绪论 1

1.1 白藜芦醇研究概况 1

1.1.1 白藜芦醇的结构与性质 1

1.1.2 白藜芦醇的研究历史与存在分布 2

1.1.3 白藜芦醇的药理作用 2

1.2 虎杖提取白藜芦醇研究概况 3

1.2.1 虎杖的研究概况 3

1.2.2 虎杖白藜芦醇的提取与分离纯化研究 5

1.2.3 白藜芦醇的分析检测方法 8

1.3 课题的意义和研究内容 9

第2章 HPLC检测白藜芦醇含量方法的建立 10

2.1 仪器与试剂材料 10

2.2 实验方法与步骤 10

2.2.1 高效色谱色谱条件 10

2.2.2 供试品溶液的制备 10

2.2.3 对照品溶液的制备 10

2.2.4 精密度实验 10

2.2.5 重复性实验 11

2.2.6 稳定性试验 11

2.3 结果与讨论 11

2.3.1仪器适用性分析 11

2.3.2 标准曲线的绘制 12

2.3.3 精密度试验 13

2.3.4 重复性实验 13

2.3.5 稳定性实验 13

2.4 本章小结 14

第3章 虎杖中白藜芦醇提取与分离纯化工艺研究 15

3.1 实验仪器与试剂材料 15

3.2 实验流程 15

3.3 实验方法与步骤 16

3.3.1 虎杖白藜芦醇的提取 16

3.3.2 催化水解试验 18

3.3.3 虎杖白藜芦醇的分离纯化 18

3.4 结果与分析 19

3.4.1 单因素实验分析 19

3.4.2 正交试验设计及结果分析 22

3.4.3 催化水解试验结果分析 23

3.4.4 白藜芦醇分离纯化试验结果分析 24

3.5 本章小结 24

第4章 结论 25

参考文献 26

致谢 28

第1章 绪论

中药是我们中华民族的伟大瑰宝，从古至今，我们一直在使用中药帮助我们强健身体和预防治疗疾病。在新时代的今天，中药也占据着重要的地位。运用现代发展的新兴科学技术，我们可以从中药中得到各种各样的天然活性物质。随着科技的进步，人们的生活水平逐渐提高，心血管疾病和癌症等疾病的发病率也逐渐提高，这就促使着我们去寻找有效的新型治疗药物，通过寻找，人们发现白藜芦醇对这些疾病具有较好的治疗效果。

1.1 白藜芦醇研究概况

1.1.1 白藜芦醇的结构与性质

白藜芦醇的化学名称为3，4’，5-三羟基-二苯乙烯，属于芪类化合物，分子式为C₁₄H₁₂O₃，相对分子量为228.25，熔点为256-258℃，在261℃升华。因为白藜芦醇含有碳碳双键，所以白藜芦醇具有顺式和反式两种不同的异构体（如图1.1所示）。两者相比而言，反式结构的稳定性更强，而且生物活性也比顺式异构体强，所以反式白藜芦醇在自然界中的分布也更为普遍。纯净的白藜芦醇为无色针状晶体，难溶于水，在乙酸乙酯、乙醇、丙酮、甲醇等有机溶剂中的溶解度较大，溶解度大小的顺序大致为：丙酮﹥乙醇﹥甲醇﹥乙酸乙酯﹥乙醚﹥氯仿等^[1]。

反式白藜芦醇 顺式白藜芦醇

图1.1 白藜芦醇的结构

在实验室定性检测白藜芦醇时，我们可以将白藜芦醇溶解在甲醇中，然后将其溶液进行光照实验或加入到不同试剂中，此时就会出现一些明显的特征颜色反应，其颜色反应如表1.1。

表1.1 白藜芦醇的特征颜色反应^[2]

1.1.2 白藜芦醇的研究历史与存在分布

白藜芦醇最早是由日本人在1940年从毛叶藜芦根部分离得到^[3]，但是由于不知道白藜芦醇的药用价值，所以在当时并没有引起人们的关注。1963年Nonomura等^[4]提出白藜芦醇是某些天然药物调节脂类代谢、治疗炎症、心脏疾病等的有效成分。1976年Langcake和Pryce^[5]在感病的葡萄叶片中发现了白藜芦醇存在，并认定其是葡萄藤为了抵御霉菌入侵而产生的一种植物抗毒素。此后，科研学者开始对白藜芦醇进行了全面研究。

目前，科学家至少已经在21个科、31个属的72种植物中发现了白藜芦醇的存在^[6]，例如：葡萄科的葡萄属、蛇葡萄^[7]，百合科的藜芦属^[8]，豆科的落花生属、决明属、槐属^[9]，姚金娘科的按属^[10]等。目前，天然的白藜芦醇主要是由虎杖和葡萄中提取得到。在植物体中天然的白藜芦醇有顺式和反式两种形式，但主要以反式存在，因为反式的稳定性更强并且生理活性更好^[11]。在植物体中，较多的白藜芦醇与葡萄糖结合，以稳定性更强的糖苷形态存在，白藜芦醇苷的含量大概是白藜芦醇含量的7~10倍左右。

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