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摘 要

本论文探索了一种以离子液体作流动相添加剂对钩藤药材中钩藤碱和异钩藤碱进行分离测定的高效液相色谱法。考察了相关色谱条件对钩藤碱和异钩藤碱的保留因子与分离度的影响，结果表明，当流动相中甲醇比例为37%，16mmol/L的1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐作添加剂，pH值为3.0时，钩藤碱和异钩藤碱的分离度可达1.92，保留因子分别为4.30和5.36。对建立的色谱方法进行了方法学考察。结果显示两种生物碱在浓度为1.56~100.00µg/mL内与其出峰面积呈良好的线性关系，检测限分别为0.905µg/mL和0.182µg/mL，重复性实验的RSD值分别为1.65%和1.43%，加标回收率为97.0%~100.5%。利用建立的方法对钩藤药材进行分离测定，结果显示其中钩藤碱与异钩藤碱的分离情况良好，能够实现钩藤药材有效成分的在线分离测定。

关键字：钩藤碱 异钩藤碱 高效液相色谱 离子液体

Separation and determination of Uncaria alkaloids by high performance liquid chromatography

Abstract

In this thesis, a high performance liquid chromatography method for the separation and determination of rhynchophylline and isoflavone in Uncaria medicinal materials using ionic liquid as mobile phase additive was explored. The effect of correlative chromatographic conditions on retention factors and degree of separation of uncarine and uncarine was investigated. The results showed that when the proportion of methanol in the mobile phase was 37%, 16 mmol/L of 1-octyl-3-methylimidazole Tetrafluoroborate is used as an additive. When the pH value is 3.0, the resolution of rhynchophylline and isoflavone can reach 1.92, and the retention factors are 4.30 and 5.36, respectively. A methodological study was conducted on the established chromatographic method. The results showed that there was a good linear relationship between the two alkaloids and their peak area in the concentration of 1.56~100.00μg/mL. The detection limits were 0.905μg/mL and 0.182μg/mL, respectively. The RSD values of the repeatability experiments were 1.65%. And 1.43%, the standard recovery rate is 97.0%~100.5%. Separation and determination of Uncaria medicinal materials were carried out by the established method. The results showed that the separation of rhynchophylline and isoflavone was good, and the on-line separation and determination of the active constituents of Uncaria medicinal materials could be realized.

KEYWORDS: Rhychophylline; Isorhychophylline; HPLC; Ionic liquids

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 绪 论 1

1.1钩藤药材简介 1

1.1.钩藤药材类别 1

1.1.2钩藤药材的药用价值 1

1.1.3钩藤药材的市场情况 1

1.2钩藤类生物碱的分离与检测 2

1.2.1薄层色谱法(TLC) 2

1.2.2紫外分光光度法(UV) 2

1.2.3高效毛细管电泳法(HPCE) 2

1.2.4高效液相色谱法(HPLC) 3

1.3离子液体 4

1.3.1离子液体的定义和性质 4

1.3.2离子液体的应用 4

1.4离子液体在HPLC中的应用 5

1.4.1离子液体作固定相 5

1.4.2离子液体作为流动相添加剂 5

1.5本课题研究的意义和内容 5

第二章 以离子液体作流动相添加剂对钩藤类生物碱的分离测定 6

2.1实验部分 6

2.1.1实验试剂 6

2.1.2实验仪器 6

2.1.3测定几种离子液体的紫外光谱性质 7

2.1.4标准溶液的配制 7

2.1.5色谱条件 7

2.1.6不同离子液体作流动相添加剂 7

2.1.7 流动相的pH不同 8

2.1.8不同浓度的[OMIM][BF₄]作流动相添加剂 8

2.1.9流动相中有机相比例不同 8

2.1.10色谱参数的计算 8

2.2结果与讨论 9

2.2.1几种离子液体的紫外光谱性质对HPLC检测的影响 9

2.2.2不同离子液体作流动相添加剂对色谱行为的影响 10

2.2.3不同pH的流动相对色谱行为的影响 11

2.2.4不同浓度的[OMIM][BF₄]作添加剂对色谱行为的影响 13

2.2.5含有机相比例不同的流动相对相关色谱行为的影响 14

2.3 结论 15

第三章 方法学考察 16

3.1实验部分 16

3.1.1实验试剂与仪器 16

3.1.2钩藤药材样品溶液的配制 17

3.1.3色谱条件 17

3.1.4线性关系考察 17

3.1.4灵敏度考察 17

3.1.5稳定性实验 17

3.1.6精密度实验 18

3.1.7重复性实验 18

3.1.8加标回收实验 18

3.2结果与讨论 18

3.2.1线性关系考察结果 18

3.2.2灵敏度考察结果 20

3.2.3稳定性实验结果 20

3.2.4精密度实验结果 20

3.2.5重复性实验结果 20

3.2.6加标回收实验结果 20

3.2.7对钩藤药材样品溶液进行分离测定 21

3.3结论 22

第四章 结论与展望 23

4.1结论 23

4.2展望 23

参考文献 24

致谢 27

第一章 绪 论

1.1钩藤药材简介

1.1.钩藤药材类别

中药钩藤是茜草科钩藤属钩藤、大叶钩藤、毛钩藤、华钩藤、或无柄果钩藤的带钩茎枝 [1]。钩藤类植物主要生长在山谷中小溪边的稀疏丛林或者灌木丛中，其主要分布在云南、福建、湖南、湖北、广东、广西、贵州等省份，在台湾也有一些分布。

1.1.2钩藤药材的药用价值

钩藤药材中含有种类众多的生物碱，而最能体现其药用价值的便是钩藤碱和异钩藤碱，它们的结构如图1-1所示。

图1-1钩藤碱和以钩藤碱的结构[2]

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