UPLC-MSMS检测人血浆中硝苯地平的浓度及其在药代动力学研究中的应用毕业论文
2022-07-23 15:00:24
论文总字数:25064字
摘 要
目的:建立测定人血浆中硝苯地平浓度的方法。方法:采用液-液萃取的方法处理血浆后以超高效液相色谱-串联质谱法进样测定。色谱柱为BDS HYPERSIL C18柱,流动相为乙腈-2mM乙酸铵和0.5‰甲酸缓冲盐溶液(56:44,v/v),流速设定为0.2 mL·min-1,多离子反应监测(MRM)使用正离子模式扫描分析,离子对分别为m/z m/z347.3→315.4(硝苯地平)、m/z 361.3→315.2(尼群地平)。结果:硝苯地平血药浓度在0.2~150ng•ml-1范围内线性关系良好(r=0.9997),定量下限为0.2ng·mL-1,内标和待测药物提取回收率均大于80%,日内、日间RSD均<9.66%。结论:本方法操作简便、快速、特异性强、灵敏度高,用于硝苯地平的药代动力学研究。
关键词:硝苯地平;超高效液相色谱-串联质谱法;药代动力学;血药浓度
Development and validation of an ultra performance liquid chromatography- tandem mass spectrometry method for the determination of nifedipine in human plasma and its application to a pharmacokinetic study
Abstract
OBJECTIVE:To establish a method for the determination of nifedipine concentration in human plasma. METHODS:The plasma procedure involved a single-step liquid-liquid extraction,then chromatographed on a BDS HYPERSIL C18col-umn with mobile phase consisted of acetonitrile and 2 mM ammonium acetate with 0.05% formic acid (60:40,v/v) at the flow rate of 0.2 mL·min-1. The protonated ions of analytes were detected in positive ionization in multiple reaction monitoring mode(MRM). The mass transition monitored m/z 347.3→315.4 and m/z 361.3→315.2 were used to detect nifedipine and nitrendipine. RESULTS:The linear range of nifedipine was 0.2~150 ng·mL-1(r=0.9997)and the lowest limit of quantitation was 0.2 ng·mL-1. The extraction recovery of IS and drug testing were both more than 80%. RSDs of intra-day and inter-day were all less than 9.66%. CONCLUSION:The method is simple,quick,specific and sensitive,and suitable for the pharmacokinetics research of nifedipine.
Key Words: Nifedipine;UPLC-tandem mass spectrometry;Pharmacokinetics;Plasma concentration
目录
摘要 I
Abstract II
第一章 文献综述 1
1.1.硝苯地平的结构及性质 1
1.1.1结构 1
1.1.2 性质 1
1.2.硝苯地平的药理、药效作用及不良反应 2
1.2.1药理作用 2
1.2.2药效 2
1.2.3不良反应 2
1.3.药代动力学及药物相互作用 3
1.3.1 药代动力学 3
1.3.2 药物相互作用 3
1.4.临床新用途 3
1.4.1. 心力衰竭: 3
1.4.2. 原发性肺动脉高压: 4
1.4.3偏头痛 : 4
1.4.4.支气管哮喘: 4
1.4.5. 雷诺氏现象: 5
1.5.超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS) 5
1.6.药代动力学的意义 6
1.6.1药物代谢动力学研究在新药发现中应用 6
1.6.2药物代谢动力学在药理学研究中的应用 6
1.6.3药物代谢动力学在制剂学研究中的应用 6
1.6.4药物代谢动力学在中药现代化中的应用 6
1.6.5药物代谢动力学在毒理学研究中的应用 6
1.7. 药代动力学参数及其应用 7
第二章 材料和方法 8
2.1材料与仪器 8
2.1.1主要试剂 8
2.1.2主要仪器 8
2.2对照品储备液和内标溶液的制备 8
2.3血浆样品处理方法 9
2.4仪器和LC-MS/MS分析条件 9
2.5方法学验证 11
2.5.1特异性 11
2.5.2线性和最低定量限(LLOQ) 11
2.5.3提取回收率和基质效应 11
2.5.4精密度和准确度 12
2.5.5稳定性和稀释 12
2.5.6残留效应 12
2.6药代动力学和统计分析 13
第三章 结果与讨论 14
3.1质谱和色谱条件的优化 14
3.2血浆样品预处理 14
3.3方法学验证 14
3.3.1特异性 14
3.3.2标准曲线和LLOQ 16
3.3.3提取回收率和基质效应 18
3.3.4精密度和准确度 19
3.3.5稳定性 20
3.3.6残留效应 21
3.4药代动力学的应用 21
第四章 结论 23
参考文献 24
致谢 26
第一章 文献综述
硝苯地平,20世纪80年代中期世界最畅销的药物之一,它是第一代钙拮抗剂,作为抗高血压、防治心绞痛药物。此药的特点就是起效快,峰/谷比值高,可以使神经体液活化。在经过多年的临床使用后,可以肯定的此药的疗效。同时硝苯地平在价格上的优势也占据了强有力的位置。但是相对来说,此药药效时间短,血压波动大,而且还具有负性肌力和负性传导作用,在一定程度上,增加了冠心病患者死亡率。
作为1,4-二氢吡啶类钙离子拮抗剂,硝苯地平的扩张冠状动脉和周围动脉作用最强,而且抑制血管痉挛效果显著,因此是变异型心绞痛的首选药物,在临床上,它适用于预防和治疗冠心病心绞痛,特别是变异型心绞痛以及冠状动脉痉挛所致的心绞痛[1]。同样对顽固性、重度高血压也具有较好的疗效,并且适用于各种类型高血压[2]。由于其能降低后负荷,从而对顽固性充血性心力衰竭也有良好疗效,可长期服用。除此之外,硝苯地平的疗效优于β受体阻滞剂,对于患有呼吸道阻塞性疾病的心绞痛病人来说也是有益的。患者大多可以耐受不良反应的发生,该过程与其药理作用、剂量和患者个体差异以及年龄有关,一般来说停药或减量可消失。而且硝苯地平血浆蛋白结合率高,在口服给药后,主要经肠、肝脏CYP3A代谢,通过肾脏排泄[3]。
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