论文总字数：17243字

摘 要

本论文建立了丹皮酚的高效液相色谱测定方法，并采用离体猪皮和透皮吸收仪研究了透过指标物质丹皮酚的透皮吸收和影响因素。检测部分采用kromasil 100-15C（250×4.6mm，5µm）柱子；以甲醇（CH₃OH)：纯水为流动相（80:20）作为流动相，柱温：28℃：流速：1ml/min；进样量：20µl。透皮吸收部分采用 YB-P6智能透皮试验仪，取猪背部和腹部皮肤，分别用20mg/ml和100mg/ml丹皮酚溶液进行实验。高效液相色谱对丹皮酚进行检测，检测速度快、准确率高、专属性好。丹皮酚对离体猪皮的透过结果良好，可作为透皮吸收研究中的透过指标物质。

关键词：HPLC 丹皮酚 透皮吸收

Through the study of transdermal absorption indicator substance

Abstract

In this paper, the establishment of a high-performance liquid chromatographic method paeonol, using in vitro percutaneous absorption instrument pigskin and studied the percutaneous absorption and factors influencing substances through indicators Paeonol. Detecting part is kromasil 100-15C (250 × 4.6mm, 5μm) column; methanol (CH3OH): water as the mobile phase (80:20) as the mobile phase, column temperature: 28 ℃: Flow rate: 1ml/min; feed sample volume: 20μl. Transdermal part is YB-P6 intelligent transdermal tester, take the pig back and abdominal skin, respectively Paeonol 20mg/ml and 100mg/ml solution experiment. HPLC paeonol detection, detection speed, high accuracy, good specificity. Paeonol isolated pigskin through good results, as transdermal absorption of substances through indicators.

Key words: HPLC ; Paeonol; Transdermal

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 丹皮酚及透皮吸收的综述 1

1.1丹皮酚的结构及相关性质研究 1

1.1.1 丹皮酚简介 1

1.1.2 提取工艺 1

1.1.3 药理作用 1

1.2.1 透皮吸收简介 6

1.2.2 影响透皮吸收的因素 6

1.2.3 中药透皮吸收研究概况 7

第二章 丹皮酚透皮吸收检测方法学研究 9

2.1 仪器与试剂 9

2.1.1 仪器 9

2.1.2 试剂 9

2.1.3 供试品及对照品 9

2.2 测定方法 10

2.2.1色谱条件研究 10

2.2.2 检测波长的确定 10

2.2.3空白干扰试验 10

2.2.4最低检出限及定量限 11

2.2.5线性关系研究 12

2.2.6进样精密度研究 14

2.2.7溶液稳定性研究 14

2.2.8 回收率试验 15

第三章 透皮吸收实验 16

3.1 仪器、试剂与材料 16

3.1.1 仪器 16

3.1.2 试剂 16

3.1.3 材料 16

3.2 实验步骤与方法 16

3.2.1 透皮吸收液的选择 16

3.2.2 透皮吸收预试验 16

3.2.3 供试品的透皮吸收实验 16

3.3 讨论 17

3.4 结论 18

展望 19

参考文献 20

致谢 22

第一章 丹皮酚及透皮吸收的综述

1.1丹皮酚的结构及相关性质研究

1.1.1 丹皮酚简介

丹皮酚(Paeonol，简称Pae)，又称牡丹酚，是从萝摩科植物徐长卿[Cynanchum paniculatum(Bunge) Kitagawa]干燥根或全草及毛茛科芍药属植物牡丹 (Paeonia SU ，-uticosa Andr．)、芍药(P．1actiflora Pal1．)的根皮中提取分离出来的活性成分。性微寒、味苦辛。丹皮酚的分子式为C9H10O3，相对分子质量为166．18，化学名称为2一羟基一4一甲氧基苯乙酮，对应的英文名称是1-(2-Hydroxy-4-methoxy-pheny1)-ethanone， CA 登记号为552—41—0，熔点约为50℃ ，易挥发，水溶性差。丹皮酚具有抑菌、抗炎、抗肿瘤、解热、镇痛、抗脂质过氧化、免疫调节等多重药理作用，临床上主要用于治疗风湿痛、胃痛、湿疹、过敏性皮炎等，具有较好的疗效。

1.1.2 提取工艺

从生药徐长卿和牡丹皮中提取丹皮酚的方法主要有有机溶剂浸出法、水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法等。李玉贤等比较了水蒸气蒸馏法、碱溶液浸泡一酸中和一水蒸气蒸馏法、酸溶液浸泡一水蒸气蒸馏法、盐溶液浸泡一水蒸气蒸馏法4种工艺，优选出直接水蒸气蒸馏法作为实验室从牡丹皮提取丹皮酚的最佳方法。王立等采用醇提法、蒸馏一煎煮法和传统煎煮法对牡丹皮进行提取，丹皮酚的收率依次为2．45％、2．26％、1．15％。实际生产中醇提法后处理复杂，除去乙醇过程中易损失丹皮酚，而蒸馏一煎煮法工艺简便，是牡丹皮提取的一种切实可行的方法。王立红等在萃取压力15MPa、萃取温度52℃ 、萃取：流量3．2I／h、萃取时间2h的条件下对徐长卿进行萃取。超临界流体萃取，以丹皮酚收率为指标，与水蒸汽蒸馏法、乙醇提取法进行比较。实验结果表明所得丹皮酚收率高于其它两种方法，显示出超临界萃取法提取温度低、提取率高、时问短等优点。

1.1.3 药理作用

1.1.3.1抗动脉粥样硬化作用

丹皮酚在动脉粥样硬化(AS)进程中发挥着重要的作用。丹皮酚调整脂质代谢是其抗AS的基础之一。戴敏等^[1]研究丹皮酚对鹌鹑实验性AS的抑制作用时发现，ig丹皮酚600mg·kg^-1，300mg·kg^-1可明显降低实验动物血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(vLDL)等含量；升高摄取外周胆固醇并将其运至肝脏代谢的主要载体物质高密度脂蛋白亚型(HDL₂)的水平；提高载脂蛋白apoA₁／apoB_loo比值，提示丹皮酚可通过改变脂蛋白的构成而调节脂质的分解、代谢和转运过程；同时还可升高HDL／TC比值，亦能表明丹皮酚对AS的防治作用。

清除氧自由基、减轻脂质过氧化反应及LDL的氧化修饰亦成为丹皮酚防治AS的重要方面。采用含胆固醇高脂膳食喂养大鼠6wk形成高脂血症模型，以硫代巴比妥酸比色法和酶标多克隆抗体夹心法分别测定MDA和氧化低密度脂蛋白，用改良沉淀法分离健康人血清LDL。ig丹皮酚300mg·kg^-1，150mg·kg^-1可明显抑制高脂大鼠血清、及肝脏脂质过氧化反应；ig丹皮酚300mg·kg^-1则显著减高脂大鼠血浆LDL的氧化修饰；且不同剂量(40ug·kg^-1~1000ug·kg^-1)丹皮酚对健康人血清LDL的体外氧化显著抑制作用^[2]。

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