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摘 要

本文基于斑马鱼模型，选取了两种FGFR特异性抑制剂PD173074 （FGFR1抑制剂）、NVP-BGJ398（FGFR1/2/3抑制剂），并且选择血管生长因子酪氨酸激酶抑制剂VRI （VEGFR1/2抑制剂）作为比较，用化学生物学的方法比较不同的选择性血管新生通路抑制剂在斑马鱼上产生的不同表型，作为筛选确证FGFR受体抑制剂的主要判断依据。结果显示VRI加药组只产生了对体节间血管的抑制作用，而不产生尾部血管簇现象，而两个FGFR抑制剂均在相应的浓度下产生了不同程度的尾部血管簇现象。结合文献中报道的FGFR抑制剂SSR128129E同样产生的尾部血管簇表型，我们推断具有类似尾部血管簇的表型小分子具有潜在的FGFR抑制活性。随后对黄芩素修饰后的衍生物FF521在斑马鱼模型上进行RT-PCR验证，结果显示化合物FF521通过VEGF与FGF两条通路都产生血管新生抑制的作用，并且对FGFR2的抑制使得其在高浓度作用组（50μM作用）在转基因斑马鱼上产生了明显的尾部血管簇现象。虽然不是特异性的FGFR抑制剂，但至少RT-PCR的结果表明该化合物是具有黄芩素结构母核的FGFR抑制剂先导化合物。

关键词：成纤维生长因子受体抑制剂 血管新生 表型筛选 斑马鱼

Based on zebrafish animal model inhibitor screening specific FGFR inhibitor

Abstract

The zebrafish model based on, selected the two FGFR specific inhibitor PD173074 (FGFR1 inhibitor), NVP-BGJ398 (FGFR1/2/3 inhibitor), and vascular growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor VRI (VEGFR1/2 inhibitor) as, chemical biological method was used for comparison between the different selective angiogenesis pathway inhibitors in zebrafish produce different phenotypes were screened out as the main criterion for confirmation of FGFR receptor inhibitors. Results show that VRI dosing group produced only the inhibitory effect of intersegmental vessels, and does not have a tail vein cluster phenomenon. Two FGFR inhibitors were at corresponding concentrations produced different degrees of tail vein of clusters. We conclude that the FGFR inhibitor SSR128129E also produces a similar tail blood vessel cluster phenotype, and we infer that the small molecule has potential FGFR inhibitory activity for the phenotype of the tail blood vessel cluster.. Subsequently of baicalein modified derivatives FF521 in zebrafish model for RT-PCR. The results showed that compound FF521 by VEGF and FGF pathways have role in inhibiting angiogenesis, and inhibition of FGFR2 makes it in high concentration group (50μM) in the transgenic zebrafish has obvious tail vein of clusters. Although it is not specific for FGFR inhibitors, at least RT-PCR results indicate that the compound is a FGFR inhibitor for the structure of the parent nucleus of the parent nucleus.

Keywords: fibroblast growth factor receptor inhibitor; angiogenesis; phenotype selection; zebrafish

目 录

摘要 I

ABSTRACT II

第一章 综述 1

1.1 两种药物筛选模式的比较研究 1

1.1.1 基于靶点的药物筛选模式概述 1

1.1.2 基于表型的药物筛选模式的特点与优势 1

1.2 斑马鱼模型用于表型药物筛选的优势 2

1.2.1 斑马鱼是可供药物筛选的脊椎动物模型 2

1.2.2 基于表型的斑马鱼药物筛选模型开发与应用 3

1.2.3 转基因斑马鱼模型是基于表型的血管新生活性筛选的理想模型 6

1.3 血管新生与疾病的关系以及血管新生调节剂在药物研发中的地位 6

1.3.1 血管新生概述 6

1.3.2 血管新生与疾病的关系 7

1.3.3 血管新生调节剂研发的研究进展 7

1.4 FGF/FGFR在血管新生调控中的研究进展 8

1.4.1 FGF/FGFR信号通路概述 8

1.4.2 FGF/FGFR对血管新生的调控机制与表型研究 9

1.5 FGF/FGFR抑制剂研究进展 10

1.5.1核酸类抑制剂 10

1.5.2糖类抑制剂 10

1.5.3多肽类抑制剂 11

第二章 特异性FGFR受体抑制剂在转基因斑马鱼体内的表型验证 12

2.1实验材料 12

2.1.1特异性FGFR受体抑制剂抑制剂结构 12

2.1.2实验动物 13

2.1.3主要实验仪器 13

2.2实验步骤 14

2.2.1斑马鱼胚胎的培养 14

2.2.2 斑马鱼血管新生抑制实验 14

2.2.3表型观察 14

2.3结果与讨论 15

2.4应用转基因斑马鱼模型从本课题组小分子化合物库中筛选潜在的FGFR抑制剂特异性表型 16

第三章 对筛选得到的活性化合物在斑马鱼模型上进行RT-PCR验证 18

3.1实验方法及基因序列 18

3.2 实验步骤 19

3.2.1 样品RNA的抽提 19

3.2.2样品cDNA合成 19

3.2.3 Real-Time PCR反应 20

3.2.4 Real time RT-PCR分析mRNA表达水平 21

3.3数据分析 21

3.3.1 qRT-PCR实验结果 21

3.3.2 Real time RT-PCR分析mRNA表达水平 22

3.4结果与讨论 22

参考文献 23

致谢 26

第一章 综述

1.1 两种药物筛选模式的比较研究

1.1.1 基于靶点的药物筛选模式概述

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