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摘 要

我国市场虾蟹品种繁多，传统鉴定虾蟹品种鉴定方是以形态结构为主。食品加工破坏了虾蟹品种的形态学结构特征，使得品种鉴定变的非常困难，从而容易造成虾蟹加工制品的品种掺假。DNA条形码为物种的鉴定提供了新的手段，弥补了传统分类的诸多不足。本课题采用通用引物对采集自我国市场的15种常见虾蟹品种进行PCR扩增和测序分析。

结果表明，所有样品均可成功提取获得DNA。在47个鉴定的片段中，有30个样品可以在物种的水平上明确鉴定（30/47，63.8%），剩下的17个样品都在Penaeidae（对虾科）的水平上鉴定出两个或两个以上的物种。

中国是虾蟹的进出口大国，该研究该项以中国虾蟹类资源展开的研究，可以有效地帮助累计基础性研究数据，保护种群发展，保护生物的多样性，对虾蟹养殖和捕捞行业的健康可持续性发展具有深远的意义。

关键词: 虾蟹 DNA条形码 PCR 序列对比 测序

Application of DNA barcode in identification of common shrimp and crab species in Chinese market

Abstract

There are many kinds of shrimp and crab in our market，the traditional method for the identification of shrimp and crab is morphological structure. Food processing destroys the morphological structure characteristics of shrimp and crab varieties, making it very difficult to identify and change the varieties, which may lead to the adulteration of shrimp and crab processed products. DNA barcodes provide a new means for identification of species and make up for many shortcomings of traditional classification. In this study, PCR amplification and sequencing analysis were performed on 15 common shrimp and crab species collected from the Chinese market by general primer.

The results showed that all samples could be successfully extracted and obtained DNA. In 47 segments of appraisement of 30 samples can be clearly identified at the species level,63.8% (30/47), the remaining 17 samples in Penaeidae level identified two or more than two species.

China is a big importer and exporter of shrimp and crab. The study of the research in Chinese shrimp crab resources, can effectively help the accumulative basic research data, protect the population development and conservation of biological diversity, prawn and crab farming and fishing industry's healthy and sustainable development has the profound significance.

Key words: Shrimp, crab DNA barcoding PCR Sequence comparison sequencing

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 我国虾蟹产业现状 1

1.1.1 虾蟹的生物学分类和营养价值 1

1.1.2 虾蟹的捕捞和养殖情况 1

1.1.3 虾蟹产品国际贸易情况 3

1.2 虾蟹类产品掺假 3

1.2.1 掺假 3

1.2.2 掺假的原由 4

1.2.3 国内虾蟹产品掺假现状 4

1.3 基于DNA的技术 5

1.3.1 RELP 5

1.3.2 Real-Time PCR 5

1.3.3 DNA条形码 6

1.4 试验目的和意义 6

第二章 材料与方法 8

2.1 采集样品 8

2.2 主要仪器与试剂 11

2.2.1 主要仪器 11

2.3实验方法 11

2.3.1 DNA提取 11

2.3.2 浓度测定 12

2.3.5 序列比对与分析 14

第三章 结果与讨论 15

3.1 DNA提取 15

3.2 PCR扩增与测序 15

3.3 序列比对与分析 17

第四章 结论与展望 20

4.1 结论 20

4.2 展望 20

参考文献 21

致谢 24

第一章 文献综述

1.1 我国虾蟹产业现状

1.1.1 虾蟹的生物学分类和营养价值

根据中国渔业年鉴（2017年），2016年，我国渔业经济总产值高达2.37亿元，比上年增加1642.4万元，同比增长7.46%。2016年，我国的水产品总量高达6901.25万吨，与上年相比，涨幅为3.01%。其中，养殖产量占比为74.51%，共计5142.39万吨，比上年相比，涨幅为4.14%；捕捞产量占比为25.49%，共计1758.86万吨，比上年相比，涨幅为-0.16%^[1]。2016年，我国水产品的占有量为49.91千克（人口13.83亿人），比2015年相比，涨幅为2.40%^[1]。

虾蟹类产品繁多，是重要的水产品之一，对国民经济的发展具有重大贡献。联合国粮食及农业组织(FAO)提出存在商业价值或存在潜在的商业价值的虾蟹的品种已超过1000重，虾已经超过400种，其中的100种左右的虾在产量上占很大的比重^[2]。在生物学分类上，虾蟹属于节肢动物门(Arthropoda)，甲壳纲(Crustacea)，十足目（Decapoda）^[3]。

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