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摘 要

基于COI基因的DNA条形码技术已被广泛用于鱼类品种鉴定。我国鱼类品种繁多，目前尚未见关于我国鱼类DNA条形码的系统研究。本研究采用通用引物对22个我国常见鱼类品种进行扩增、测序，并对序列进行分析。

结果发现，采用Armani et al., 2014的盐析法可以从所有样品中提取出高质量DNA，且所有样品均可以扩增出约650bp的COI条形码片段。序列比对分析发现，所有样品均可鉴定到属，但只有10个鱼种（45.5%）可在物种水平进行准确鉴定，遗传距离分析表明，种间距离小于种内距离的10倍是造成无法在物种水平准确鉴定的主要原因之一。

本研究为建立适用于我国常见鱼类品种的DNA条形码技术提供了理论依据。本课题的实施可为政府监管部门准确鉴定市场鱼类品种提供准确的途径，起到规范我国水产品市场和保护消费者权益的作用。

关键词：DNA条形码 COI基因 系统发育分析 鱼类品种

Evaluation of COI barcoding for the identification of commercial fish species on Chinese market

Abstract

COI gene-based DNA barcode technology has been widely used for fish species identification. There are many varieties of fish species on Chinese market, while a systematic study on the DNA barcodes of commercial Chinese fish species is still not available. This study used universal primers for PCR amplification and sequencing of 22 common fish species on Chinese market and evaluated the performance of COI barcoding for the identification of Chinese fish species.

Results highlighted the successful DNA isolation from all the collected fish samples and the successful amplification of about 650 bp on COI gene from all the DNA extracts. Sequence analysis found that all samples could be identified at genus level. While only 10 species (45.5%) could be accurately identified at the species level. Genetic distance analysis showed that 54.4% of the species and their similar species could not be distinguished, due to the less than 10 times between interspecies and their corresponding intraspecific distances.

This study provides a theoretical basis for the establishment of a DNA barcoding technology, which is suitable for common fish species in China. The implementation of this study can provide government regulators with an accurate way to identify market fish species, which also can play an important role in regulating the market of aquatic products in China and protect the rights and interests of consumers. It also provides scientific assistance in the analysis of fish species resources, the detection of imported fish species, and aquaculture.

Key Words: DNA barcoding; COI gene; Phylogenetic analysis; Chinese commercial fish species

目 录

摘要……………………………………………………………………………………………I

ABSTRACT…………………………………………………………………………………II

第一章 文献综述 1

1.1水产品概述 1

1.2 水产品品种掺假 1

1.2.1食品欺诈 1

1.2.2 鱼类品种掺假 1

1.3 相关法律法规 2

1.4 基于DNA的鉴定技术 3

1.4.1 PCR-RFLP 3

1.4.2荧光PCR 4

1.4.3 DNA条形码 4

1.4.4 可用于鱼类鉴别的数据库 5

1.5 本项目的意义 5

第二章 材料与方法 7

2.1样品采集 7

2.2 主要仪器 14

2.3 主要试剂 14

2.4 实验方法 15

2.4.1 DNA提取 15

2.4.2 DNA浓度和纯度测定 15

2.4.3 总DNA电泳 15

2.4.4 PCR扩增及测序 15

2.4.5 序列比对与分析 16

第三章 实验结果与讨论 17

3.1 DNA 提取 17

3.2 PCR扩增与测序 18

3.3 序列比对与分析 19

第四章 结论与展望 22

4.1结论 22

4.2展望 22

参考文献 23

附录A…………………………………………………………………………………………27

致 谢 30

文献综述

1.1水产品概述

1978年以来，我国水产品产量保持快速增长。2016年，我国水产品总产量达到了6901.25万吨，比改革开放以来增长了14.8倍^[1]。不仅在国内，2016年，我国水产品总产量在世界水产品总产量中的占比达到61.7% ^[2]。

水产品具有低脂肪、高蛋白、富含多种微量元素等特点。世界各国均在其膳食指南中不断增加水产品的消费比重。例如英国推荐每周280克，美国推荐每周12盎司^[3]。近年来，随着我国居民可支配收入增加以及人们对饮食健康的逐步重视，水产品的消费水平提高。2015年，我国城乡居民人均水产品消费量分别达到了19.34kg和5.36kg，比1985年分别增加了2.48 和3.35^[4]。

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