论文总字数：12532字

摘 要

食品安全问题是一个属于全人类的重要课题，由食源性致病菌引发的食物中毒事件屡见不鲜。金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性疾病致病菌，其传统检测方法耗时久，而快速检测对菌浓要求较高，需要找到一种更高效准确的集菌方法。

本研究致力于研究用免疫磁珠对金黄色葡萄球菌进行快速灵敏的特异性富集。该法免于以往的增菌培养过程，直接集菌，再结合荧光PCR技术，从而验证其富集效果。

实验中选取了不同的免疫磁珠添加量、抗体添加量及吸附时间进行比较，研究这些条件下免疫磁珠吸附金黄色葡萄球菌效果的影响。实验结果显示，最优条件为：磁珠添加量20μg、抗体添加量100μg、金黄色葡萄球菌浓度10²CFU/mL、吸附时间30min。混合吸附实验中的吸附效率为87%。总时长在6h左右，检测时间较短，为快速检测方法提供了参考。

关键词：金黄色葡萄球菌 免疫磁珠 富集技术

Optimization enrichment of Staphylococcus aureus based on immunomagnetic beads

Abstract

Food safety an issue of crucial importance for all human beings. Food poisoning incidents caused by foodborne pathogens are not uncommon. Staphylococcus aureus is a common pathogen causing foodborne diseases. In a general，its detection technique takes too long.In the meantime, the rapid detection technique requires high concentrated levels of bacteria. So it is quite necessary to seek out a more efficient and accurate method.

This study is dedicated to the rapid and sensitive specific enrichment of Staphylococcus aureus with immunomagnetic beads. The method is free from the previous enrichment culture process, directly collects bacteria, and then combines with fluorescent PCR technology to verify its enrichment effect.

In the experiment, the effects of different magnetic beads addition, antibody addition, adsorption time and other conditions on the adsorption of Staphylococcus aureus by immunomagnetic beads were compared. The experimental results show that the optimal conditions are: magnetic beads addition amount 20μg, antibody addition amount 100μg, Staphylococcus aureus concentration 10²CFU/mL, adsorption time 30min. The adsorption efficiency in the mixed adsorption experiment was 87%. The total time is about 6h, which is shorter than traditional method and can be a reference for the rapid detection method.

Keywords: Staphylococcus aureus; Immunomagnetic beads; Enrichment technique

目录

摘 要 II

Abstract III

第一章 文献综述 6

1.1 食源性致病菌 6

1.2 金黄色葡萄球菌 6

1.3 金黄色葡萄球菌的检测方法及研究现状 7

1.3.1鉴别培养法 7

1.3.2基于免疫学法检测 7

1.3.3基于核酸探针的检测技术 8

1.3.4 基于PCR的检测技术 8

1.4 食源性致病菌的分离、富集技术 9

1.4.1 离心分离技术 9

1.4.2 改良增菌培养基法 9

1.4.3 膜分离技术 10

1.4.4 免疫磁富集 10

1.5 研究内容与意义 10

第二章 实验材料与方法 12

2.1 实验材料 12

2.1.1 实验菌种 12

2.1.2 实验试剂和仪器 12

2.2 实验方法 13

2.2.1 菌种活化 13

2.2.2 免疫磁珠的制备 13

2.2.3 免疫磁珠添加量对吸附率影响的实验 13

2.2.4抗体添加量对吸附率影响的实验 13

2.2.5菌液浓度对吸附率影响的实验 13

2.2.6吸附时长对吸附率影响的实验 14

2.2.7 免疫磁珠吸附混合菌种能力实验 14

2.2.8测量DNA浓度和纯度 14

2.2.9 荧光PCR法定性检验 14

第三章 结果与讨论 15

3.1 免疫磁珠添加量对吸附性能的影响 15

3.2 抗体添加量对吸附性能的影响 16

3.3 菌液浓度对磁珠吸附性能的影响 16

3.4 吸附时长对磁珠吸附性能的影响 17

3.5 混合菌种吸附结果 18

第四章 结论与展望 19

4.1 结论 19

4.2 展望 19

参考文献 20

致谢 23

第一章 文献综述

1.1 食源性致病菌

人类的生产加工活动离不开微生物，在人类漫长的历史中，不仅驯化了作物和动物，还学会了利用微生物来改进食品的风味和口感，另一方面，也有一些微生物会对人体造成侵害，他们能诱发食品的腐败，在人体内寄生，产生有毒物质，这类微生物被称为食源性致病菌[^[1]]。

随着经济发展，全球贸易加速，食品的流动速度增快，加工规模更大，工艺更复杂，任何一个环节的污染都可能引发范围更广，人数更多的事故。然而，食品性致病菌广泛存在于自然界中，由其引发的卫生问题，是人们关注的重中之重。据估计，美国一年有6至80万人受其影响，食源性疾病造成高达9000人死亡，耗资约5亿美元。

请支付后下载全文，论文总字数：12532字