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应用DNA条形码和mini-DNA条形码技术鉴定南京市场常见鱼肉加工制品中的鱼类品种开题报告

 2020-06-03 22:07:00  

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

文 献 综 述

1.1 水产品的营养价值

水产品种类繁多,包括鱼类、贝类、藻类和虾蟹类等,是一种营养价值非常均衡的食物。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

研究或解决的问题:

(1) 对市场上的103份水产品进行DNA提取;

(2) DNA条形码和mini-DNA条形码的扩增;

(3) 序列分析及物种鉴定;

采用的研究途径:

(1) DNA的提取

取约200mg肌肉组织于2ml圆底离心管中,加入200micro;l 组织裂解液(500 mM Tris-HCl pH 8.0, 100 mM EDTA, 100 mM NaCl, 2% SDS)和200micro;l磷酸盐缓冲液(300 mM pH 8.0),用无菌手术剪刀将肌肉组织剪碎。再向该离心管中加入20micro;l蛋白酶K(20mg/ml),并将离心管置于65℃恒温水浴锅裂解60min。裂解结束后,14000g离心5min,吸取上清液并转入新的2ml圆底离心管。加入0.5倍体积的乙酸钠溶液(4M, pH 8.0),振荡混匀,14000g离心5min,吸取上清液并转入新的2ml圆底离心管。再加入0.5倍体积的乙酸钠溶液,振荡混匀,14000g离心5min,吸取上清液并转入新的1.5ml尖底离心管。加入0.6倍体积的异丙醇,振荡混匀,静置5min后14000g离心10min,弃去上清液。加入800micro;l 70% 乙醇,振荡混匀,14000g离心3min。弃去上清液,再加入800micro;l 100%乙醇,振荡混匀,14000g离心3min,弃去上清。75℃烘箱烘干后加入30micro;l 灭菌超纯水溶解DNA,并置于-20℃贮藏。DNA的浓度和纯度(A260nm/A230nm和A260nm/A280nm)用核酸蛋白测定仪测定,并稀释至100ng/micro;l备用。DNA的完整性通过1%琼脂糖凝胶电泳检测。

(2)通用引物扩增DNA条形码和mini-DNA条形码;

表1 DNA条形码和mini-DNA条形码通用引物

Primer name

Primer sequence (5′-3′)

Barcode length (bp)

FISHCOILBC_ts

CACGACGTTGTAAAACGACTCAACYAATCAYAAAGATATYGGCAC

705bp

FISHCOIHBC_ts

GGATAACAATTTCACACAGGACTTCYGGGTGRCCRAARAATCA

Fish_miniE_F_t

CACGACGTTGTAAAACGACACYAAICAYAAAGAYATIGGCAC

226bp

Fish_miniE_R_t

GGATAACAATTTCACACAGGCTTATRTTRTTTATICGIGGRAAIGC

M13F (-21)

CACGACGTTGTAAAACGAC

NA

M13R (-27)

GGATAACAATTTCACACAGG

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