青霉素G酰化酶突变体在β-内酰胺类抗生素合成中的研究开题报告
2020-05-02 17:09:15
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文 献 综 述 1.β-内酰胺类抗生素的研究概况 青霉素类、头孢菌素类及其他β-内酰胺类(包括碳青霉烯类,单环的β-内酰胺类及β-内酰胺酶抑制剂)共同组成β-内酰胺类抗生素。
由于β-内酰胺类抗生素抗菌谱广、抗菌活性强,适应症多,疗效好,不良反应少,目前已成为最重要化学治疗药物,是抗生素研究开发和临床应用最为活跃的领域。
由于各种抗生素的广泛使用,各种微生物势必加强其防御能力,通过改变自身代谢途径或产生相应的灭活物质,抵御抗菌药物的侵害,从而使微生物对抗菌药物的敏感性降低甚至消失。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
1.主要研究内容及关键技术 本课题以实验室筛得的粪产杆菌来源的青霉素g酰化酶为对象,通过氨基酸序列对 比分析,确定prpga中的三个对合成活性影响显著的关键位点,并对三个预测位点进行 定点饱和突变,运用pcr进行全质粒扩增。
将获得的质粒导入到e.coli bl21(de3) 中,参照文献报道方法筛选高合成活性prpga突变体。
将筛选得到的最佳突变体运用于 实际合成β-内酰胺类抗生素当中,并与prpga野生型作对比,检测底物含量以及动力 学常数,对结果进行分析和讨论。
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