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固定化糖基转移酶催化合成白藜芦醇苷开题报告

 2020-06-10 22:44:54  

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

1. 白藜芦醇的性质及作用 白藜芦醇苷又称虎杖苷(polydatin,pd),分子量390.40,分子式c20h22o8,熔点:130-140℃,是白藜芦醇(resveratrol,res)与葡萄糖结合的产物,化学名3,4',5-三羟基芪-3-β-单-d-葡萄糖苷。

最初发现于蓼科植物虎杖,主要来源于其根茎,是其有效天然活性成分。

具有抗肿瘤、抗氧化、抗血小板聚集、对血管平滑肌细胞和肝脏等的保护作用。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

本课题要研究的问题: 本课题主要研究ugtbl1糖基转移酶(glycosyltransferas)和蔗糖合成酶(sucrose synthetase, ss)的固定化方法合成白藜芦醇苷,以避免游离酶体系中因ss短时间内聚集沉淀造成的催化活性降低;通过双酶的固定,偶联ss催化的尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose, udpg)的合成和ugtbl1糖基转移酶催化的白藜芦醇苷(polydatin)的合成,降低udpg的使用量,以减少催化反应成本;研究如何降低底物(白藜芦醇)抑制。

拟采用的研究手段: 总体策略:尝试多种酶固定化方法如包埋、吸附、共价固定、交联及其联用,检验双酶(ugtbl1糖基转移酶、ss)酶活及其回收率、稳定性、最适ph、最适反应温度、动力学常数km等指标,以筛选出最优固定手段。

1. 通过查阅文献,了解国内外同行糖基转移酶固定化方法,设计实验方案; 2. 分别以海藻酸钠、二氧化钛、树脂等为固定化载体,对双酶(ugtbl1糖基转移酶、ss)进行固定化; 3. 检测固定化双酶体系的活性以验证固定化效果,初步筛选出可行的固定化方式; 4. 通过改变固定化条件(温度、ph、时长、浓度、双酶比例等),进一步优化固定化方式; 5. 通过比较各固定化酶的酶活回收率、最适反应ph、温度、稳定性等指标,最终筛选出最优方法。

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