论文总字数：15412字

摘 要

目的：通过构建对乙酰氨基酚诱导的肝细胞凋亡模型，利用虎杖苷给药干预以此探讨虎杖苷对于肝细胞凋亡是否存在抑制作用。

方法：为了探讨虎杖苷是否对对乙酰氨基酚诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用，我们首先建立肝细胞受损模型，利用虎杖苷对细胞进行干预保护。我们通过MTT比色法检测虎杖苷对细胞活性的影响，Annexin-V/PI双染流式细胞法和DAPI荧光染色法检测细胞凋亡情况，线粒体膜电位检测对乙酰氨基酚和虎杖苷对细胞线粒体膜电位的影响。

结论：MTT比色法实验结果表示虎杖苷干预后细胞活性增加，Annexin-V/PI双染流式细胞法和DAPI荧光染色法实验结果证明了虎杖苷减少对乙酰氨基酚诱导的细胞凋亡的情况。线粒体膜电位检测证实了虎杖苷可抑制对乙酰氨基酚造成的细胞线粒体膜电位的坍塌。

关键词：虎杖苷 对乙酰氨基酚 肝细胞 细胞凋亡

Abstract

OBJECTIVE:

we established an acetaminophen-induced hepatocyte apoptosis model to investigate whether polydatin could inhibit hepatocyte apoptosis induced by APAP,

METHODS:

In order to investigate whether polydatin has an effect on acetaminophen-induced hepatocyte apoptosis, we first established a hepatocyte injury model in vitro. Afterwards, MTT assay was used to detect the effect of polydatin on cell viability. We conducted DAPI staining assay and Annexin V/PI staining assay to examine whether polydatin could reduce apoptosis induced by APAP in L-02 cells . Finally, mitochondrial membrane potential (MMP) was then determined using JC-1 staining.

RESULTS:

The result of MTT assay showed that polydatin increased cell activity after intervention. Annexin V/PI staining assay and DAPI staining assay showed that polydatin could reduce cell apoptosis induced by APAP. Mitochondrial membrane potential detection manifested that polydatin palliated apoptosis in L-02 cells by relieving the mitochondrial dysfunction..

Keywords: Polydatin; Acetaminophen; hepatic cell; apoptosis

目录

摘要 I

Abstract II

目录 I

第一章 文献综述 1

1.1概述 1

1.1.1虎杖苷简述 1

1.1.2对乙酰氨基酚简述 1

1.2虎杖苷药理作用 2

1.2.1保肝作用 2

1.2.2 免疫调节和抗炎作用 2

1.2.3 抗菌抗病毒活性 3

1.2.4 抗氧化活性 3

1.2.5 抗肿瘤活性 3

1.2.6 对细胞分化、凋亡的作用 4

1.2.7 对内皮细胞作用 4

1.2.8 对心血管作用 4

1.2.9 对呼吸系统作用 5

1.3 细胞凋亡 5

1.4研究现状 6

第二章 材料与仪器 7

2.1 实验材料 7

2.1.1细胞及细胞培养所需药品 7

2.1.2相关试剂 7

2.2 实验所需仪器 8

第三章 实验步骤 9

3.1 细胞培养 9

3.1.1 肝细胞培养 9

3.1.2 细胞换液 9

3.1.3 细胞传代 9

3.2 给药干预 9

3.2.1 虎杖苷干预 9

3.2.1对乙酰氨基酚诱导肝细胞凋亡模型 9

3.3 实验检测 10

3.3.1 MTT比色法考察虎杖苷对APAP诱导的肝细胞凋亡的抑制作用 10

3.3.2 Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡 10

3.3.3 DAPI荧光染色观察虎杖苷对APAP诱导的肝细胞凋亡的形态学改变 11

3.3.4 线粒体膜电位检测 11

第四章 实验数据 13

4.1 MTT实验结果 13

4.2 Annexin- V/PI双染实验结果 13

4.3 DAPI荧光染色结果 14

4.4 线粒体膜电位检测结果 15

第五章 实验结论 17

参考文献 18

致谢 21

第一章 文献综述

1.1概述

1.1.1虎杖苷简述

虎杖苷（Polydatin）是植物虎杖中的活性成分。多生长于避光阴凉潮湿的地方，华中、华南、西北、云贵川等地是其主要产地。虎杖苷又称白藜芦醇苷，化为学名3，4'，5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖苷(3，4'，5-trihydrox-stilbene-3-β-mono-D-glucoside)，属于芪类化学物。

图1 植物虎杖和虎杖苷的化学结构

研究发现虎杖拥有丰富的药理活性。在心血管方面，具有调血脂、扩张血管、改变血流变、保护心肌等作用；同时也可以抗菌抗病毒；虎杖苷还能保肝、抗炎、抗肿瘤并且能够改善阿尔茨海默病及预防艾滋病等。现临床多用于镇咳平喘、保肝利胆、止血消炎、抗菌等用途。

1.1.2对乙酰氨基酚简述

对乙酰氨基酚 (扑热息痛, Acetaminophen, 简称APAP) , 是当前临床应用最为普遍的OTC类解热镇痛药[1]。临床上主要用于普通感冒或流行性感冒引起的发热, 缓解轻至中度疼痛，如关节痛、神经痛、偏头痛以及手术后止痛等。作用机制是通过抑制中枢神经系统COX-3活性抑制PG合成产生解热镇痛作用。APAP在治疗剂量下能够对病症进行准确的治疗，无太大副作用，能够做到安全用药, 但过量中毒可产生急性肝损伤。

图2 对乙酰氨基酚化学结构

1.2虎杖苷药理作用

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