论文总字数：22070字

摘 要

目的 ：建立一种简便、快速、灵敏的LC-ESI-MS/MS方法，同时测定大鼠血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯浓度，并研究这三种活性物质在大鼠体内的药物代谢动力学特征。方法 ：100 μL血浆样品采用甲基叔丁基醚—二氯甲烷（3:1）液液萃取，选择右啡烷为内标。经BDS Hypersil C18 色谱柱 (2.1×100 mm 2.4 μm)等度洗脱，乙腈—2 mM乙酸铵（含0.05%的甲酸）（60:40）为流动相，采用AB Sciex 4000 Q TRAP型三重四级杆串联质谱，ESI源，多反应监测（MRM）正离子模式。经检测吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯和内标的检测离子对分别为m/z 304.3→134.4，m/z 288.1→273.3，m/z 471.3→425.2，m/z 258.0→201.0。结果 ：血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯三个分析物的线性范围均为0.5-1000 ng/mL（R＞0.9960），提取回收率均大于70%，日内、日间（RSD）精密度均小于15%，回收率（RE）均在±10%范围以内。大鼠口服吴茱萸提取物后血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯C_max分别为19.02±2.15 ng·L^-1 、19.83±5.83 ng·L^-1和41.61±7.48 ng·L^-1，T_max分别为1.17±0.29 h、1.25±0.66 h和0.63±0.14 h，T_1/2分别为为4.64±2.14 h、5.72±1.34 h和4.25±1.72 h。吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯绝对生物利用度(F%)分别为16.96±2.80、12.02±3.17和5.43±1.99。结论：该方法可以准确、快速、灵敏地测定血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的浓度，并成功用于适用于临床前药物代谢动力学的研究。

关键词：吴茱萸碱 吴茱萸次碱 吴茱萸内酯 LC–MS/MS 药代动力学 绝对生物利用度

Simultaneous determination and absolute oral bioavailability of evodiamine, rutaecarpine and evodin concentration in rat plasma by LC-MS/MS

Abstract

Objective A simple, fast and sensitive method based on liquid chromatography with electrospray ionization coupled to tandem mass spectrometry detection (LC-ESI-MS/MS) was developed for the simultaneous determination of evodiamine, rutecarpine and evodin in rat plasma, and study absolute oral bioavailability of these three substances in healthy rats. Method The analytes were extracted from100 μL plasma samples by liquid-liquid extraction using a mixed methyl tert-butyl ether : methylene chloride (3:1) and dextrorphan was selected to be the internal standard. Chromatographic separation of analytes was performed by a BDS Hypersil C18 column (2.1×100 mm 2.4 μm). The mobile phase was consisted of acetonitrile and 2 mM ammonium containing 0.05% formic acid (60:40, v/v).Detection was carried out by electrospray ionization AB Sciex 4000 Q TRAP triple quadrupole mass spectrometry in multiple reaction monitoring (MRM) mode. The ion combination of m/z 304.3 → 134.4 , m/z 288.1 → 273.3, m/z 471.3 → 425.2, m/z 258.0 → 201.0 was used to qualify Evodiamine, Rutaecarpine , Evodin and the internal standard,respectively . Result Linear calibration curves were obtained in the concentration range of 0.5-1000ng/mL for three (Evodiamine, Rutaecarpine and Evodin). Extraction recovery was over 70% in plasma.The intra-day and inter-day precisions (RSD) values were lower than 15% and recovery (RE) was within ± 10% at three QC levels for all. The main pharmacokinetic parameters of C_max, T_max , T_1/2 were 19.02±2.15 ng·L^-1,1.17±0.29 h,4.64±2.14 h for Evodiamine ; 19.83±5.83 ng·L^-1,1.25±0.66 h,5.72±1.34 h for Rutaecarpine ; 41.61±7.48 ng·L^-1,0.63±0.14 h,4.25±1.72 h for Evodin, respectively.Compared with i.v administration, the absolute bioavailability of Evodiamine, Rutaecarpine and Evodin were 16.96 ± 2.80, 12.02±3.17 and 5.43±1.99, respectively. Conclusion This method was shown to be accurate, rapid and sensitive for the simultaneous determination of Evodiamine, Rutaecarpine and Evodin in rat plasma concentrations and successfully used for preclinical pharmacokinetic studies.

Key words: Evodiamine; Rutaecarpine ; Evodin ; LC-MS/MS ; pharmacokinetics ; absolute bioavailability

目录

摘要 I

ABSTRACT II

第一章 文献综述 1

1.1吴茱萸的化学成分 1

1.2吴茱萸碱的药理学特征 1

1.2.1对心脏的作用 1

1.2.2 辣椒素样作用 2

1.3吴茱萸次碱的药理作用 2

1.3.1对血压的作用 2

1.3.2对血栓形成和凝血功能的作用 3

1.3.3减肥作用 3

1.4吴茱萸内酯的药理作用 4

1.4.1镇痛作用 4

1.4.2抗炎作用及使体温升高 4

1.4.3抗肿瘤作用 4

1.5吴茱萸的应用 5

1.5.1药用 5

1.5.2食品 5

第二章 材料与方法 6

2.1 仪器与试剂 6

2.1.1 试剂与试药 6

2.1.2 仪器 6

2.1.3 实验动物 6

2.1.4 液相色谱条件 6

2.1.5 质谱检测条件 7

2.2 实验方法 9

2.2.1 工作液及内标溶液的配制 9

2.2.2 吴茱萸提取物HPLC含量检测 9

2.2.3 血浆样品处理方法 9

2.2.4 SD大鼠药代动力学实验 9

第三章 结果与讨论 12

3.1 特异性考察 12

3.2 线性关系考察 12

3.3 精密度与回收率 12

3.4 提取回收率与基质效应 13

3.5 稳定性考察 14

3.6 药代动力学研究结果 15

3.7 讨论 16

参考文献 18

致谢 22

第一章 文献综述

1.1吴茱萸的化学成分

吴茱萸为芸香科植物吴茱萸 Evodia rutaecarpa (juss.) Benth，含有生物碱、挥发油及苦味素等化学成分，具有镇痛、抗氧化 ^[1]、减肥作用^[2]、抗癌 ^[3,4]等广泛的药理作用。Wei等报道吴茱萸和吉西他滨合用，可以通过调节PI3K/Akt信号通路起到增强吉西他滨抗胰腺癌疗效^[5]。经过现代中药炮制技术炮制后发现其生物活性成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对疾病的治疗发挥更大的疗效。Kim, S.Jd等研究发现吴茱萸碱能抑制脂肪细胞分化达到减肥的效果^[6]。并且吴茱萸碱通过抑制与食欲有关的神经肽NPY和AGRP ^[7] 达到减轻小鼠体重的效果。吴茱萸次碱通过芳香烃和钙依赖性机制诱导CYP1A1的表达^[8]。吴茱萸内酯（柠檬苦素）也是吴茱萸的一种重要活性成分，具有抗肿瘤^[9]，抗炎^[10]，抗氧化能力^[11]和抑制P-糖蛋白活性^[12]作用。

最近，Wen等报道了LC-MS/MS结合固相萃取（SPE）法测定人血清中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的浓度，最低检测限分别为5.2和10.2 ng/mL^[13]。Lin等采用LC-ESI-MS法同时检测兔子血浆中的吴茱萸碱和吴茱萸次碱浓度，定量下限均为5 ng/mL^[14]。但迄今为止，目前国内外尚未见有HPLC-MS/MS同时检测鼠血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的血药浓度的报道。且已有报道中，对于生物样品的前处理多采用固相萃取或蛋白质沉淀法。其中固相萃取，操作过程繁琐、成本高不适合快速分析；而蛋白质沉淀，将带来大量的内源性杂质干扰，存在严重的基质效应。

请支付后下载全文，论文总字数：22070字