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摘 要

实验目的：本研究通过体外细胞实验验证由LPS引起的肝细胞损伤是否能被柠檬苦素所抑制。

实验方法：探讨对于柠檬苦素是否抑制脂多糖诱导形成的肝细胞损伤，我们首先进行细胞培养，在DMEM培养基中培养HepG2细胞，然后用LPS诱导，建立肝细胞损伤模型，并用不同浓度的柠檬苦素进行给药干预。接着采用MTT法检测细胞活力，以考察柠檬苦素对LPS诱导的HepG2细胞损伤的影响，并通过Annexin-V/PI 双染检测细胞凋亡率来评价柠檬苦素抑制LPS诱导的细胞凋亡的药效，以及检测LDH水平来评估细胞毒性。

实验结论：MTT实验结果显示，用LPS刺激后，HepG2细胞的细胞活力明显下降，但是经过柠檬苦素预处理后，HepG2细胞活力明显上升，且呈浓度依懒性。Annexin-V/PI 双染法证明柠檬苦素通过抑制细胞凋亡来保护HepG2细胞免受LPS引起的肝损伤。LDH活性检测表明，与模型组相比，柠檬苦素降低了HepG2细胞中LDH的释放，且呈剂量依赖性。

关键词：柠檬苦素 脂多糖 肝细胞 细胞凋亡

Limonin inhibits liver injury induced by LPS

Abstract

Objective:In this study, we used in vitro cell experiments to see if damage to liver cells induced by LPS could be suppressed by limonin.

Methods:To investigate if limonin suppresses liver cell damage caused by lipopolysaccharides, we first performed culture, cultured HepG2 cells in medium DMEM, and then incubated with LPS to establish a model of hepatocyte injury, which we used in a variety of prevention studies. Limonin drug. Next, cell viability was measured by the MTT method to study the effect of limonine on HepG2 cell damage induced by LPS, and the degree of apoptosis was assessed by annexin-V / PI double-staining to evaluate apoptosis induced by LPS activity and levels. LDH to evaluate cytotoxicity.

Results: The results of MTT experiments showed that after LPS cell stimulation, the cell viability of hepG2 decreased significantly, but after the use of limonine, the activity of HepG2 cells increased significantly and latency was observed. Double-stranded annexin-V / PI expression proves that limine protects HepG2 cells from liver injury induced by LPS by inhibiting apoptosis. Detection of LDH activity showed that compared with the mouse group, limonin reduced LDH release in HepG2 cells in a dose-dependent manner.

Keywords:Limonin; Lipopolysaccharide(LPS); hepatocyte; apoptosis

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 柠檬苦素简介 1

1.1.1柠檬苦素的结构和性质 1

1.1.2柠檬苦素的生物活性 1

1.1.3柠檬苦素的研究现状 3

1.1.4柠檬苦素的临床应用 4

1.2 LPS诱导的肝细胞损伤 4

1.2.1 LPS作用机制 4

1.2.2肝细胞损伤 5

1.2.3 LPS诱导的肝细胞损伤机制 5

1.3柠檬苦素在脂多糖诱导的肝细胞损伤中的抑制作用 6

第二章 材料与仪器 7

2.1 实验材料和试剂 7

2.1.1实验材料 7

2.1.2相关试剂 7

2.2 实验仪器 7

第三章 实验步骤 9

3.1细胞培养 9

3.2 MTT检测 9

3.2.1 MTT实验原理 9

3.2.2 MTT制备 9

3.2.3 MTT实验方法 9

3.3 AnnexinV/PI染色 9

3.3.1 Annexin-V/PI双染法原理 10

3.3.2 Annexin-V/PI双染法实验过程 10

3.4 分析LDH活性 10

3.4.1 LDH活性试剂盒原理 10

3.4.2实验方法 11

第四章 实验数据 12

4.1 MTT实验结果 12

4.2 Annexin- V/PI双染实验结果 12

4.3 LDH活性分析 14

第五章 结论与展望 15

5.1结果与讨论 15

5.1.1实验结论 15

5.1.2讨论 15

5.2展望 15

参考文献 16

致谢 20

第一章 文献综述

1.1 柠檬苦素简介

1.1.1柠檬苦素的结构和性质

柠檬苦素类化合物主要从芸香科植物的核、内果皮和囊衣等部位中提取得到，属于植物次生代谢产物，生物活性高，种皮中该类化合物的含量最高，其次是种籽和汁囊。柠檬苦素类化合物的结构主要包括苷元和配糖体两个部分，两者之间以糖苷键相连，结合在苷元的碳17位。柠檬苦素的主要性质是由苷元与配糖体的结构决定的，苷元，结构中的非糖部分，具有水溶性差，味苦等特点，而配糖体一般为芳香酯，有香味且水溶性好^[1]。

柠檬苦素是分子量为470.53的一种化合物，其分子式为 C₂₆H₃₀O₈，（化学结构式详见图1）。柠檬苦素类似物具有相同的活性结构，即大多数该类化合物在C-17位都连有一个能诱导谷胱甘肽硫转移酶的呋喃环，而且在C-14, C-15位上有环氧结构^[2]。柠檬苦素在酸性和碱性条件下极其不稳定，容易发生水解反应，最终生成糖和苷元，并且易受光照、温度等环境因素的影响，导致分子结构发生改变甚至失活。

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