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摘 要

本研究通过市场调查，收集了各类市售组胺快速检测产品，初步验证了各类快检产品用于测定水产品中组胺的适用性，并确定采用比色卡法作为快速测定水产品中组胺的方法。

本研究对样品处理方法、提取液用量、提取时间、显色时间进行了优化，并按照食品快速检测方法评价相关技术规范的要求对市售组胺试剂盒进行了评价，评价结果表明，三种用于测定水产品中组胺的市售组胺试剂盒：检测限200mg/kg，其各项指标均达到灵敏度≥95%、特异性≥85%、假阴性率≤5%和假阳性率≤15%的要求。

关键词： 快速检测 组胺 方法评价

Evaluation of Rapid Detection for Histamine in Water Products

Abstract

In this study, through market research, various types of commercially available rapid formaldehyde detection products were collected, and the applicability of various types of fast testing products for the determination of formaldehyde in water-based products was initially verified. Finally, the AHMT colorimetric card method was determined as a rapid test facility to detect formaldehyde in the water-based product.

In this study, the sample processing method, the dosage of extraction solution, the extraction time and the color development time were optimized. According to the requirements of relevant technical specifications for the evaluation of food rapid detection methods, the commercially available histamine kits were evaluated. The evaluation results showed that the three commercially available histamine kits were used to determine histamine in aquatic products, with a detection limit of 200mg/kg, and all the indexes reached the requirements of sensitivity ≥95%, specificity ≥85%, false negative rate ≤5% and false positive rate ≤15%.

Key Words: Rapid detection; Histamine; Evaluation

目录

摘要 II

Abstract III

第一章 前言 1

1.1 食品中组胺对健康的危害 1

1.2 课题背景与来源 1

1.3 课题内容与研究手段 2

第二章 市场调研及验证 4

2.1市售快检试剂盒状况 4

2.2市售组胺快检试剂盒的验证与选择 4

第三章 比色卡法 8

3.1适用范围的确定 8

3.2比色卡法的前处理研究 8

3.3标准比色卡的制备 14

3.4比色卡法方法评价 15

3.5 比色卡法的验证 20

第四章 分光光度法 23

4.1最大吸收波长的优化 23

4.2 标准曲线的制作 23

4.3 方法准确度和精密度的确定 24

4.4 分光光度法中阳性样品的判定 25

4.5方法学考察 25

4.6分光光度法的验证 28

第五章 总结 32

参考文献 33

致谢 34

第一章 前言

食品中组胺对健康的危害

组胺又称组织胺，化学式为C₅H₉N₃。组胺的结构见图 1‑1。

图 1‑1 组胺结构式

组胺可能毒害鸡和豚鼠等动物。4.0 ~4.5 mg/kg体重的腹腔注射量即可引起豚鼠死亡;用胃管经口给予的致死剂量为150 ~ 200 mg/kg体重。当组胺累积到一定量时便有中毒的危险。成年人摄入组胺超过100毫克(相当于1.5mg/kg体重）即被认为中毒。组胺中毒会出现头疼、头晕、脉快、胸闷、心跳呼吸加快、血压下降的症状,有时出现荨麻疹,咽部烧灼感,个别患者出现哮喘^[1]。

课题背景与来源

组胺是在脱羧酶作用下由组氨酸产生的。许多组织，特别是肺和肠道粘膜含有大量组胺。组织受损或发生炎症和过敏反应时释放组胺。

现在与组胺有关的主要国家食品标准有:GB 5009.208-2016《国家食品安全标准食品中生物胺的测定》^[2]，SN/T 5123-2019 《进出口饲料组胺测定 比色法和酶联免疫吸附法》^[3]等。

食品中组胺检测方法大致可归纳为^[4]：分光光度法、高效液相色谱法、胶体金法、比色卡法、酶联免疫法、生物化学法、生物酶法、薄层层析法8大类及其他检测方法。比色卡法和分光光度法的应用相对广泛。分光光度法检测结果可由分光光度计直接读取，数字直观准确，但是需要使用分光光度计仪器。比色卡法更适合作为快速检测水产品中组胺的方法，检测结果可由目视比色直观得到，但是比色卡法得到的结果颜色容易受到干扰，需要不断改进。胶体金法稳定性好，操作简便，成本低，广泛应用于快检技术。高效液相色谱法灵敏度高，但成本高。薄层色谱设备简单、操作简便，但灵敏度低。生化法具有选择性强、灵敏度高，但生物固化膜不稳定^[5]。

本研究通过研究改进提取方法及简化步骤，依据组胺的化学特性，综合考虑成本、环保、快速等因素，准备建立精准有效的快速检测方法，为国内食品安全提供有力的快检技术手段。

课题内容与研究手段

本课题要研究的问题是组胺快速检测方法的研制与评价验证。通过收集市面上的快速检测试剂盒，然后制备样品基质，并对组胺快检试剂盒生产企业进行调研，其商品化产品主要包括：比色卡试剂盒、分光光度法试剂盒、定性试剂盒。采用空白阴性样品和加标准溶液形成加标样品对试剂盒检出限、灵敏度等性能指标进行初步验证。

在对选定的快速检测盒产品的验证结果汇总后，进行检测方法的比较和选择，根据参考文献资料及验证实验结果，对组胺快速检测方法进行优化及确定，根据试剂盒方法学评价结果，确定最优方法并进行方法学评价，准备样品和试剂盒交由验证机构，目前我国检测组胺的各种方法的测定原理及检出限见表 1‑1，最后汇总多方的验证结果对水产品中组胺的快速检测方法进行编制说明。因此，确定水产品中组胺的快速检测研究技术线路见图 1‑2：

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