双黄酮的分离及标样制备研究毕业论文
2021-02-28 21:41:54
摘 要
银杏生物活性物质有重要的医疗保健作用，银杏叶中双黄酮化合物作为黄酮类化合物中的一种，由于其含量较少，缺乏分析技术，目前存在标样纯度低，价格昂贵等情况。本论文从银杏叶中提取活性物质、双黄酮粗产品的除杂、分析色谱检测条件的确定、制备型高效液相色谱条件的确定到最终得到高纯度双黄酮样品。
本论文中以银杏叶为原料，采用乙醇提取银杏叶粉末三次，经乙酸乙酯-正丁醇以及石油醚除杂后进行HPLC-UV检测，然后经等度洗脱与梯度洗脱后确定检测较佳条件为初始甲醇浓度为70%等度洗脱十分钟后，于二十分钟内将甲醇浓度升至90%，添加0.005 mol/L TFA与0.005 mol/L乙酸。通过调节制备型色谱梯度洗脱条件，得最佳分离条件为保留初始甲醇浓度80% 5分钟，随后于35分钟内升至甲醇浓度为96%，添加0.005 mol/L TFA与0.005 mol/L乙酸，最终得到三个双黄酮精制品，其中白果素27.5 mg，纯度87.9%、银杏黄素amp;异银杏黄素60.5 mg，纯度96.9%、金松双黄酮37.7 mg，纯度93.9%。
关键词：双黄酮；白果素；银杏黄素amp;异银杏黄素；金松双黄酮；分离分析；NMRamp;MS
Abstract
窗体顶端
Ginkgo biloba bioactive substances have an important role in health care，biflavonoids from Ginkgo biloba leaves is a kind of flavonoids. Due to its low content and lack of analytical techniques, the standard sample is expensive and the purity of it is low.In this paper, we prepared a set of experimental procedures including the extraction of active substances from Ginkgo biloba leaves, the purification of crude products of flavonoids, the conditions of chromatography,the determination of preparative high performance liquid chromatography conditions. Finally, we get high purity biflavone samples.
In this paper, we used Ginkgo biloba leaves as raw material,then we used ethanol to extract Ginkgo biloba’s powder three times.After that we used HPLC-UV to detected the samples which have been purified by ethyl acetate-butanol and petroleum. After elution and gradient elution, the optimum conditions were determined as follow. We firstly eluted the sample isocraticly for 10 minutes by the initial methanol concentration of 70%.Secondly we rose the methanol concentration to 90% over 20 minutes and added 0.005 mol / L TFA and 0.005 mol / L acetic acid at the same time.We also got the optimum conditions after exploration. The method of gradient elution of preparative chromatographic could be that, keeping the initial methanol concentration 80% for 5 minutes firstly, and then taking the concentration of methanol to 96% over 35 minutes with 0.005 mol / L TFA and 0.005 mol / L acetic acid , Finally three refined biflavonoids were obtained, there was 27.5 mg of bilobetin,with purity of 87.9%, 60.5 mg of ginkgetin and isoginkgetin with purity of 96.4%, 37.7 mg of sciadopitysin with purity of 93.9% .
Keywords: Biflavone; Bilobetin; Ginkgetin and isoginkgetin; Sciadopitysin; Separation and analysis; NMR and MS
目录
摘 要 I
Abstract II
第一章 绪论 1
1.1 黄酮的保健作用及其研究进展 1
1.1.1 自然界的黄酮类化合物 1
1.1.2 银杏黄酮苷及其开发 4
1.2 银杏双黄酮生物活性及其研究进展 7
1.2.1银杏双黄酮及其生物活性 7
1.2.2 银杏双黄酮的提取分离纯化方法 8
1.3 本课题的研究内容 10
第二章 分析色谱探索高纯多组分双黄酮的分离条件 11
2.1 实验部分 11
2.1.1 实验仪器及试剂 11
2.1.2 实验方法 11
2.2 结果与讨论 13
2.2.1从银杏叶到双黄酮粗品 13
2.2.2多组分双黄酮分析制备条件初探 15
第三章 高纯单组分双黄酮的色谱制备及其结构分析 21
3.1 实验部分 21
3.1.1 实验仪器与试剂 21
3.1.2 实验方法 21
3.2 结果与讨论 22
3.2.1 双黄酮的制备色谱条件的探讨 22
3.2.2 高纯双黄酮结构分析 25
3.2.3 双黄酮纯度的检测 29
第四章 总结与展望 31
参考文献 32
致谢 35
第一章 绪论
1.1 黄酮的保健作用及其研究进展
黄酮类化合物是一类重要的多酚类化合物，广泛分布在植物中，由于其被研究出独特的药理活性，被现代的科学家高度重视，其中最早关于黄酮类化合物的综述报道是1962年的“The Chemistry of Flavonoid”。目前已知的天然黄酮类化合物已经超过5000多种[1]，黄酮类化合物存在于几乎所有绿色植物中[2]，它在被子植物中广泛存在，如芸香科、菊科、玄参科、唇形科、伞形科、爵麻科、苦苣苔科、豆类等都有存在[3]。
1.1.1 自然界的黄酮类化合物
（1）自然界黄酮类化合物的结构、分类
黄酮类化合物是具有具有两个芳香环的C6—C3—C6结构的酚类化合物[4]，该环通过中心三碳连接。根据C3部分的环化、氧化程度以及取代基的不同来分类，总结各类黄酮类化合物的母体、代表化合物、存在植物以及药用作用于表：
