1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

地西他滨（decitabine）化学名为4-氨基-1-(2-脱氧-β-d-赤型-呋喃核糖)-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮，美国supergen公司研发，2006年04月美国fda批准上市，临床主治骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome，mds）。地西他滨是一种去甲基化药物，具有独特的甲基化转移酶抑制剂的治疗机制。作为一种2#8217;-脱氧胞苷酸的腺苷类似物，地西他滨在体内转化为5#8217;-单磷酸脱氧胞苷类似物，在dna聚合酶作用下渗入dna中，抑制dna的合成及甲基化，从而抑制肿瘤细胞增殖^[1]。

具有抗癌活性的核苷类似物是一类抗代谢物,主要在于拮抗核苷酸代谢。这类化合物产生细胞毒的机制有三个方面:一是核苷类似物在生化反应中作为伪底物,抑制核苷酸从头合成的相关酶,干扰dntps库,从而抑制dna的复制。二是核苷类似物掺入dnr和rna,中断dna和rna链的延伸。三是抑制核酸合成的相关酶,如dna聚合酶和核酸还原酶等,从而抑制核酸大分子的合成和修复^［3-5］。核苷类似物的化学结构与天然核苷有着不同程度的相似性，在细胞代谢中，可与正常核苷形成竞争关系，具有干扰核酸的合成及抑制相关聚合酶结合的作用，进而阻断肿瘤细胞和病毒的复^［2］。

目前，制备核苷类似物的方法主要有三种化学合成法，碱基修饰法，生物转化法^[6]。根据它们的优缺点选定生物转化法，这种方法需要用到两种酶： 核苷磷酸化酶和 n-脱氧核糖转移酶，前者通过 2 步反应可逆地催化核苷（或脱氧核苷）生成核糖-1-磷酸和碱基，核糖-1-磷酸再与另一种碱基结合生成新的核苷，但此酶不能用于催化合成胞嘧啶核苷类化合物^［8］；后者主要来源于大肠杆菌、莱氏乳细菌和瑞士乳杆菌^［7］，可通过一步催化反应高效地合成核苷类似物，反应过程中无中间体的产生^［8］，且底物适用范围更广。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

实验室菌库为基础，致力于用n-脱氧核糖转移酶催化合成地西他滨，并优化了反应条件。 需解决的问题：

1.以5-氮胞嘧啶和2-脱氧尿苷为底物用n-脱氧核糖转移酶催化合成地西他滨，并进行鉴定。

2.考察反应ph对地西他滨转化率的影响。