论文总字数：23400字

摘 要

目的：探讨基于气相色谱-质谱联用（GC/MS）分析精浆中脂肪酸代谢组学的方法。方法：收集正常人30例和弱精子症患者30例精浆，衍生化后采用GC/MS分析精浆中脂肪酸等内源性代谢物的变化。采用不分流进样模式，固定相为3%苯基甲基硅氧烷，载气为氦气，流速为1mL/min的恒定流量，并采用程序升温技术，两种离子源的温度均为250℃。离子源电压70eV。质谱记录的速度为每秒2.91次扫描，扫描范围50至550m/ z。溶剂延迟设置为5min。结果：该方法的线性良好（r²gt;0.99）。定义检测限等于3，定量检测限等于5，相对应的样品浓度为0.004和0.05，灵敏度较高。批间和批内精密度均在±15%内。结论：本方法操作简便、快速、特异性强、灵敏度高，可以作为辅助手段应用于弱精症的诊断。

关键词：弱精症；脂肪酸；GC/MS分析；代谢组学；

Establishment of analytical method of fatty acid in seminal plasma based on GC/MS

Abstract

OBJECTIVE：To analyze the method of fatty acid metabolism in seminal plasma by gas chromatography- mass spectrometry (GC/MS).METHODS：seminal plasma from 30 patients normal persons and 30 patients with weak sperm were collected.The change of endogenous metabolites such as fatty acids in seminal plasma were analyzed after derivatization. Using a splitless mode with the stationary phase of 3% phenyl methyl silicone at the Constant flow rate of 1mL/min，and using temperature programmed technique.The temperature of MS transfer line and ion source was both set at 250℃. The ion source voltage was 70eV.MS spectra were recorded at rate of 2.91 scans per second with a scan range from m/z 50 to 550. The solvent delay was set as 5min.RESULTS：the method display good linearity(r²gt;0.99).The signal-to-noise ratio of 3 was defined as the level of LOD and that of 5 was the level of LOQ,the corresponding sample concentrations were 0.004 and 0.05,showing a higher sensitivity.RSDs of intra-day and inter-day were all in ±15％.CONCLUSION：The method is simple，quick，specific and sensitive，which may be helpful for the diagnosis of the disease as an auxiliary method.

Key Words: Weak sperm disease; Fatty acid; GC/MS analysis; Metabolism;

目录

摘 要............................................................................................................................................I

Abstract.........................................................................................................................................II

第一章 文献综述 1

1.1 弱精子症 1

1.1.1 弱精子症的介绍 1

1.1.2 弱精子症产生的主要原因 1

1.2 精浆 2

1.3 精浆中的脂肪酸 2

1.3.1 精浆中的脂肪酸介绍 2

1.3.2 精浆中的脂肪酸的作用机理 3

1.3.3 精浆中脂肪酸的药理药效学研究 3

1.4 代谢组学 4

1.4.1 代谢组学介绍 4

1.4.2 GC/MS代谢组学研究关键技术 4

1.4.3 GC-MS技术与其他色谱-质谱联用技术的比较 5

1.4.4 GC-MS代谢组学面临的挑战................................................................6

第二章 实验部分 7

2.1 材料和方法 7

2.1.1 化学试剂 7

2.1.2 样品的采集 7

2.1.3 GC/MS法分析人的精浆 7

2.2 方法验证 8

2.2.1 线性度 8

2.2.2 灵敏度 8

2.2.3 精密度 8

2.3 代谢组学研究 9

2.3.1 混合溶剂的制备 9

2.3.2 GC/MS分析的样品制备 9

2.3.3 数据采集，处理和统计分析 9

第三章 实验结果与讨论 10

3.1 精浆中的代谢物 10

3.2 方法学考察结果 14

3.2.1 线性 14

3.2.2 灵敏度 15

3.2.3 精密度 16

第四章 结论 18

参考文献 19

致谢 22

第一章 文献综述

1.1 弱精子症

1.1.1 弱精子症的介绍

弱精子症(Oligoasthenotspermi)是指精液中前向运动的a和b级精子小于50%或者a级运动的精子小于25%的病症，又被称做精子活力低下^[1]，是当今社会中最常见男性不育病症。在不育夫妇中原发不育症达25%，而由于男性有明显异常的就占50%^[2]。近年来男性的精子质量呈逐年下降趋势，有研究表明这一现象与工作压力的增大、日益加重的环境污染和性传播疾病等因素有关。相比于20年前，近年男性精浆中的精子无论是数量还是质量都出现了不同程度的下降，这使男性不育的发生率增加。对此，世界卫生组织还根据临床评估的标准方法和精液质量的评价性为男性不育提出了一个诊断分类，其实这些分类都存在一定的争论，所以很多是描述性的，而不是病因^[3]。

1.1.2 弱精子症产生的主要原因

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