论文总字数：15931字

摘 要

现代药理学研究证实苍术多糖在胃肠系统免疫调节、改善代谢紊乱及保肝等方面均表现出了良好的药理活性。目的：本研究旨在对苍术多糖进行提取，分离纯化得到纯化后的苍术多糖，再对其进行结构表征包括多糖分子量及纯度测定、单糖组成测定以及糖苷键的种类及连接方式测定，方法：用水提醇沉法提取苍术中的多糖，对其进行化学组成分析。通过离子交换色谱法及分子排阻色潽法对苍术粗多糖进行分离纯化，最终得到苍术纯化多糖，再通过HPSEC-MALLS-RID、UV-vis、GC/MS等对纯化多糖进行结构表征，确定了苍术纯化多糖的一级结构。结果：通过热水浸提法提取得到苍术粗多糖，提取率为18.8%，粗多糖的总糖含量为48％，经过离子交换色谱法及分子排阻色潽法的纯化得到苍术纯化多糖ALP-1，其总糖含量为87.8％，糖醛酸含量为1.4%，且该多糖中不含淀粉、核酸及蛋白质等物质，通过对其结构表征后得出ALP-1是一种中性菊型果聚糖，分子量为5.494KDa，单糖组成为葡萄糖GLu：果糖Fru=1.0：24.9，糖苷键类型为(Fruf)1→、(GLcp)1 →和→2-(Fruf)-1→。

关键词 ： 苍术多糖、分离纯化、结构表征、糖苷键类型

Isolation, purification and Structural Characterization of Polysaccharides from Natural sources

Abstract

Modern pharmacoLogicaL studies have confirmed that atractyLodes oLigosaccharides and poLysaccharides have shown good pharmacoLogicaL activities in the gastrointestinaL system for immune reguLation, improvement of metaboLic disorders and Liver protection. The purpose of this study was to extract poLysaccharides from AtractyLodes sinense L. and purify the purified poLysaccharides, and then carry out structuraL characterization incLuding moLecuLar weight, gLycosidic bond type and monosaccharide compositio. Method: extracting poLysaccharides from AtractyLodes Lancea L. by water extraction and aLcohoL precipitation Composition anaLysis. The crude poLysaccharides from AtractyLodes chinensis L. were isoLated and purified by ion exchange chromatography and moLecuLar excLusion chromatography. The purified poLysaccharides were obtained by AtractyLodes Lancea L., and the pure thing were characterized by HPSEC-MALLS-RID, UV-vis, GC/MS. The primary structure of poLysaccharides purified by AtractyLodes Lancea. RESULTS: The crude poLysaccharide of AtractyLodes chinense L. was extracted by hot water extraction method. The extraction rate was 18.8%, the total sugar content of the crude polysaccharide was 48%. The purified polysaccharide ALP- 1 was obtained by ion exchange chromatography.and moLecuLar excLusion chromatography. 1, the most suger is 87.8%, the uronic acid content is 1.4%, and the poLysaccharide does not contain starch, nucLeic acid and protein, etc., through its structuraL characterization, it is concLuded that ALP-1 is a neutraL daisy type Fructose has a moLecuLar weight of 5.494 KDa, a monosaccharide percent of the gLucose GLu: fructose Fru=1.0:24.9, and a gLycosidic bond type of (Fruf) 1→, (GLcp)1 → and →2-(Fruf)-1→.

Key words : AtractyLodes poLysaccharide, separation and purification, structuraL characterization, gLycosidic bond type

目录

摘要 I

Abstract II

目录 IV

第一章 文献综述 1

1.1.苍术多糖性质及简介 1

1.1.1.苍术的简介 1

1.1.2.苍术中多糖的研究与作用 1

1.2 天然来源多糖研究水平概述 2

1.2.1.国内外研究情况概述 2

1.2.2.天然多糖的分离提取方法 2

1.2.3 天然多糖的纯化技术 3

1.2.4.天然多糖的结构表征 4

1.3 本研究意义及主要内容 5

第二章 实验材料及方法 7

2.1.实验材料 7

2.1.1.实验仪器 7

2.1.2 实验试剂 8

2.1.3 实验原材料 9

2.2 水提法提取苍术多糖 9

2.3 苍术粗多糖的纯化 10

2.3.1 苍术多糖的离子交换柱层析 10

2.4.苍术多糖的化学组成分析 11

2.4.1.总糖含量测定： 11

2.4.2.苍术多糖淀粉含量测定： 12

2.4.3.糖醛酸含量的测定： 12

2.5苍术纯化多糖ALP-1的结构表征 13

2.5.1苍术纯化多糖的纯净度以及分子质量测定 13

2.5.2紫外可见光谱测定 13

2.5.3单糖组成测定  14

2.5.3甲基化分析 15

第三章 结果与讨论 17

3.1.苍术粗多糖提取率的计算 17

3.2.苍术粗多糖的纯化 17

3.2.1.苍术多糖的离子交换柱层析 17

3.2.2.苍术多糖的分子排阻凝胶柱层析 18

3.3苍术多糖的含量测定 19

3.3.1苍术多糖的总糖含量测定 19

3.3.2苍术多糖的淀粉含量测定 19

3.3.2苍术多糖的糖醛酸含量测定 20

3.4苍术纯化多糖ALP-1的结构表征 21

3.4.1苍术纯化多糖的分子量及纯度测定 21

3.4.2紫外可见光谱测定 21

3.4.3单糖组成 23

3.4.4甲基化分析 25

第四章 结论与展望 27

4.1结论 27

4.2展望 27

参考文献 28

第一章 文献综述

1.1.苍术多糖理化性质建明概述

1.1.1.苍术的简单介绍

苍术（Atractylodes Lancea (Thunb.) DC.）：菊科苍术属多年生草本植物。茎部常生长为根状物，常常卧状或斜向生长，其根部不定型生长，植物体整个长度最长可以达到100cm，呈不规则连珠状或结节状圆柱形，生长过程中会发生弯曲，偶尔会生长处分化的枝节，长3～10cm，直径1～2cm。顶端具茎痕或残留茎基。质地比较硬表面灰棕色，切断之后断层面常常为灰色或白色，其内部含有油类物质，切断后外溢油类为黄色或橙红色，被切开一段时间后，可析出白色细针状结晶。气香特异，味微甘、辛、苦，在我国主要分布在江苏、河南、河北、山西、陕西等地[^[1]]。苍术常常生长在阴凉潮湿的环境中，常见的生长地点常常为草丛以及灌木丛中，其生存能力较强，荒地及斜坡上也可生长种植，是我国常见的一类著名中药材，苍术主要成分有倍半萜类、多炔类、植物甾醇类、芳香苷类等。苍术的入药部分主要为其根状的茎部，常在春天和秋天两个季节进行采挖，除去泥沙，摘去须根，晾干后，再进行煎煮的一种中药。其在中医临床上，为运脾药，性味苦温辛烈，主要具有燥湿健脾，祛风散寒，明目等功效[^[2]]。其在中医治疗中常用来治疗夜盲，坐立不能，风寒湿气所致的关节及神经疼痛及由于其气候湿热引起的各类疾病。苍术根据南北气候及地域差异被分为两类，生长于北方的被称为北苍术，生长于南方的被称为南苍术。现在的科学研究认为苍术具有多种生物活性，例如治疗帕金森氏综合症、胃溃疡、抗癌、抗缺氧、抗菌等[^[3]]。

1.1.2.苍术中多糖的研究与作用

苍术中含有水溶性多糖，具有良好的药理作用，国内对于苍术的挥发油成分研究是比较广泛普遍的，相较而言对于非挥发成分及水溶性成分如糖类的研究要少很多，两者都具有良好的药理作用，其挥发成分具有降低血压、利尿、抗癌、抗缺氧和抗炎等作用非挥发成分具有肠免疫调节等多种调节作用^[[4]]。且苍术在我国分布广泛，便于获取，是一类良好的中药材。目前研究已从苍术根茎中提取出三种多糖分别是ALR-5Ⅱa-1-1（阿拉伯半乳聚糖），ALR-a（ALR-5Ⅱb-2-2），ALR-b（ALR-5Ⅱc-3-1），具有肠免疫系统调节的活性[^[5]]。

1.2 天然来源多糖研究水平概述

1.2.1.国内外研究情况概述

植物多糖具有多种药理作用，其广泛的参与到机体的各项生理调节中，具有调节机体免疫功能，降血脂，降血糖，抗氧化等多种生物活性[^[6]]。根据多糖的来源可将其大致分为植物多糖、真菌多糖、动物多糖、藻类多糖和细菌多糖这5大类[^[7]]。随着对多糖的深入研究，研究者发现多糖的结构远比蛋白质和核酸复杂的多，而功能性多糖又与其结构特性如构型、单糖组成、相对分子质量、糖苷键类型等因素密切相关[^[8]]。因此，对多糖的研究不仅仅要关注其理化性质及其生物活性方面，更要关注多糖的结构-功能关系。

1.2.2.天然多糖的分离提取方法

多糖类物质是一种多羟基的大分子聚合物，所以难溶于甲醇等小极性的溶剂，易溶于水等大极性的溶剂[^[9]]。多糖种类繁多，并且具有不同的化学结构与特性，想要进一步对多糖的性质进行深入的研究对于多糖的提取技术是不可忽视的步骤。目前来说，天然多有较多的办法。

(1)水相提取法

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