论文总字数：17276字

摘 要

本实验目的是建立高效液相色谱法测定盐酸益母草碱含量，为其它研究提供良好的测定含量方法。高效液相色谱是化学物质成分定性和定量分析最重要和有效的手段。高效液相色谱特点是高压、高速、高效、高灵敏度、应用范围广，除此之外，高效液相色谱能反复使用，易回收。HPLC含量测定原理为：某物质在最大吸收波长处检测，浓度与峰面积呈正比。方法:采用HPLC, 使用（5 μm, 250 mm×4.6 mm )的Baseline® C₁₈色谱柱, 以（2.88 gSDS 1 ml乙醇 100 ml纯水）：纯甲醇=25:75作为流动相，检测波长为277 nm，流速1.0 mL·min^-1 ，柱温为30 ℃。结论：按现行药典推荐的方案，对本方法进行验证，作为含量测定方法，其重复性，专属性，精密度，线性，回收率，耐用性，符合规定要求保证质量，且操作简单方便。

关键词：盐酸益母草碱 含量测定 高效液相色谱法

The content of motherwort hydrochloride was determined by HPLC

ABSTRACT

The purpose of this experiment is to build a HPLC way for the detection of leonidine hydrochloride and to provide a good method for other studies.The most essential and efficacious method for qualitative and quantitative analysis of chemical composition is HPLC..High performance liquid chromatography is characterized by high voltage, high speed, high performance, high sensitivity and use widely. In addition, HPLC can be used again and again and is easy to reclaim.HPLC content determination principle is: a substance at the maximum absorption wavelength detection, concentration and peak area is positive ratio.Methods: using HPLC method, using (5 μm , 250 mm x 4.6 mm) of the Baseline ® C18 chromatographic column, with (2.88 gSDS 1 mL of ethanol 100 mL water) : they captured the pure methanol = 25:75 as mobile phase, detection wavelength of 277 nm, flow rate of 1.0 mL·min^-1, column temperature 30 ℃.Conclusion: according to the scheme of "validation of analytical methods for drug quality standards" recommended by the current pharmacopoeia, the validation of this method can be used as a content determination method, and its repeatability, specificity, precision, linearity, recovery rate and durability can ensure the quality in accordance with the specified requirements.,and the operation is simple and convenient

Keywords: leonurine hydrochloride; content determination; HPLC

目 录

摘要 Ⅰ

ABSTRACT Ⅱ

第一章 文献综述 1

1.1 前言 1

1.2. 盐酸益母草碱的理化性质 1

1.3. 盐酸益母草碱的研究进展 2

1.3.1.益母草碱的药理学研究 2

1.3.2.盐酸益母草碱的药物动力学研究 3

1.3.3临床疗效及不良反应 3

1.4适应症和作用机制 3

1.4.1骨质疏松症 3

1.4.2糖尿病 4

1.4.3心肌保护 5

1.4.4慢性脑缺血认知功能障碍 5

1.4.5心肌肥大 6

1.4.6 动脉粥样硬化 6

第二章 实验部分 7

2. 1 实验试剂与仪器 7

2. 1.1 实验试剂 7

2.1.2 实验仪器 7

2.2 实验方法 8

2.2.1检测波长的选择 8

2.2.2流动相的选择 8

2.3盐酸益母草碱含量测定方法的建立 9

2.3.1专属性试验 9

2.3.2线性关系考察 9

2.3.3精密度试验 9

2.3.4重复性试验 10

2.3.5回收率试验 10

2.3.6最低检测限 10

2.3.7最高定量限 10

2.4盐酸益母草碱含量的测定方法 11

第三章 实验结果 12

3.1结果与讨论 12

3.1.1检测波长的确定 12

3.1.2盐酸益母草碱含量测定方法的建立 13

3.2盐酸益母草碱含量测定 16

第四章 结论 17

参考文献 18

致谢 21

第一章 文献综述

1.1 前言

益母草为唇形科植物益母草（Leonurus japonicus Houtt）的新鲜或干燥的部分[1]，作为一种中草药，它具有多种功效，在最初被用为治疗妇科的疾病，随着时间的发展，它可以用在越来越多的方面[2]。益母草含有多种化合物以及丰富的微量元素，在这当中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱是益母草的主要有效成分[3]。益母草碱是益母草所特有的，是新版药典上规定的质量控制指标之一。它的功效非常的多，能防止血栓的形成;对心脏、血管、中枢等都有一定的作用[4-7]。脑卒中属于急性脑血管常见疾病又叫“中风”。其中缺血性脑卒中发病率比出血性高大概有五分之三,在我国这已经成为死亡原因中的第一，在整个世界中，脑卒中也是致死的第二大常见原因。因而这方面的研究对整个世界人们的健康有重大意义。缺血性脑卒中是指患者脑部组织供血动脉中血流突然降低或者停止,引起供血脑组织因缺血及氧而坏死、软化[8]。主要症状表现为晕厥、疼痛等,症状大的患者可能出现手脚无力，说不清楚等中枢功能受损的症状。发病时间长以及反复发作等特点,都困扰着患者以及家属[9]。脑卒中的每年的生病人数都在升高,甚至伤残和死亡的人数也在升高。近几年,随着社会老龄化程度不断加深,缺血性脑卒中发病率及死亡率日益增长，社会的热切关注着。因而，找到有效治疗的药物十分重要，而益母草碱近年来被证实对于缺血性脑卒中有一定点治疗效果。当然，益母草碱对很多其它症状都有一定的效果，例如骨质疏松、糖尿病、心血管疾病等，因而有一个简便又准确的测定盐酸益母草碱含量的方法对于实验进展十分重要。

1.2. 盐酸益母草碱的理化性质

是益母草碱盐酸盐；密度：1.29 g/cm³;熔点：191-193℃分子式：C₁₄H₂₂ClN₃O₅；分子量:347.79458；沸点：531.6℃在760毫米汞柱中。白色结晶粉末，可溶于部分有机溶剂。益母草碱能够抗氧化、抗凋亡[10-12]。盐酸益母草碱是大部分益母草碱在自然界中存在的形式，只有极少部分以单体形式存在^[13]。

分子结构：

1.3 盐酸益母草碱的研究进展

作为中草药提取物，其质量与原料产地等都会有关系。它是中药益母草所特有的生物碱，又叫SCM-198。它对于心脏、血管、中枢都有保护作用，还能够抗糖尿病，对药流后子宫有抑制出血的作用，也能够治疗前列腺增生。除此之外，最新研究表明它有利于心血管疾病，如动脉粥样硬化急性和慢性心肌梗死，还有可能治疗骨质疏松症、糖尿病。硅胶柱色谱法、大孔树脂法、合成法、超声波法、微波法。现在测定的益母草碱的方法有雷氏盐剩余比色法、雷氏盐沉淀溶解比色法、紫外、薄层色谱法、HPLC。

1.3.1 益母草碱的药理学研究

1. 对子宫的作用：用大鼠制备药流后子宫出血的模型，记录出血时间以及出血量。一组模型组大鼠使用益母草碱进行给药，对子宫各方面进行检测比对分析。整合数据得出结果：给药组的出血时间和出血量显著降低，益母草碱组显示能显著提高大鼠血清E2水平，但对P无明显影响[14]。实验表明药物能够对子宫有兴奋作用，能抑制药流后子宫出血，且剂量和强度有正相关。,药物能减少子宫出血以及出血时间[15]，加快子宫内的残留物的排除，从而抑制子宫出血[16]。这可以使得进行了药流手术的妇女可以加快痊愈的进程。

1. 对心血管系统的作用：小剂量对心脏有增强收缩作用，使用大量时反而会减弱。对于血管会使其收缩，其程度与浓度有依赖性。进而，对此药的作用机制进行了相关实验，证明该药注射静脉之后会使血压暂时下降，而降低血压作用可能对是迷走神经末梢的兴奋作用所致。
2. 益母草碱对心肌的作用：近年来临床及动物实验均证实益母草具有抗心肌缺血的作用[17]。用益母草有效成分生物碱对大鼠心肌损伤作研究，结果证明益母草有效成分生物碱和黄酮对皮下注射异丙肾上腺素造成的大鼠心肌损伤具有保护作用[18]。因而，我们对该碱进行研究，表明其可以保护心肌，所以可以应用到医疗上。
3. 对脑部：在行为学，抗氧化应激能力，细胞形态结构，防止神经元丢失等方面发挥脑缺血的神经保护作用。益母草碱可能通过降低PC12（神经细胞株）在OGD条件下Cx36（哺乳动物间隙连接蛋白）及P-CaMKII/CaMKII（蛋白激酶）的高表达来发挥保护作用。
4. 对呼吸中枢：有相关实验表明小剂量可以兴奋呼吸，大剂量抑制。为了知道本品作用在哪个部位，又进行了一些实验，最后得出结论为本品可能对呼吸中枢有直接兴奋作用。 
5. 其他作用：该药可以通过排Na ,保K ，从而有利尿作用。抑制肌酸激酶活性：通过降解肌酸激酶的二聚体结构从而抑制其活性。抗血小板聚集活性和降血粘度：益母草碱能改善微循环和红细胞的变形能力，降低血液浓度来治疗血瘀症。对大鼠缺血性脑梗阻以及缺血再灌注引发的脑梗塞有良好的保护作用[19]。其作用机制可能与其良好的抗氧化、抗凋亡作用以及调节线粒体功能有关[20]

1.3.2 药物动力学研究

口服给药绝对生物利用度非常低，说明可能与它的首过效应高有关。高浓度对子宫肌膜的局部麻醉作用而呈抑制作用[21]。相关实验证明它的的氧葡萄糖醛酸化的结合物占代谢90%多，符合酚这类化合物代谢特点。益母草碱在灌胃给药后分布广泛，在胃、肾、肝分布最广，心、肺、脾和胰腺等分布其次，不易通过血脑屏障。在比格犬体内静脉注射和单次灌胃给药后，益母草碱在体内均呈二室开放模型，进入体内迅速分布，但消除缓慢，消除半衰期超过6h[22]。毒代动力学实验表明比格犬单次给药后盐酸益母草碱的AUC随剂量不成比例的线性增加，盐酸益母草碱在比格犬体内有蓄积现象，在大鼠体内无明显蓄积现象。

1.3.3 临床疗效及不良反应

盐酸益母草碱以前多用于治疗子宫出血、痛经等疾病，近年来研究出了它的多种用途，如：降低动脉粥样硬化进程；通过抑制NF-κB信号通路和ROS产生来抗炎；降低血液粘度来治疗瘀血证；保护心肌；保护神经和大脑，对缺血性脑卒中有效；治疗前列腺增生；保钾利尿；治疗糖尿病；治疗骨质疏松症

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