1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文献综述

1. 概述

黄体酮注射液化学名称为：孕甾-4-烯-3，20-二酮，分子式：C21H30O2,分子量：314.47。辅料：苯甲醇、大豆油（供注射用）。 本品为无色至淡黄色的澄明油状液体。

用于月经失调，如闭经和功能性子宫出血、黄体功能不足、先兆流产和习惯性流产（因黄体不足引起者）、经前期紧张综合征的治疗^[1]。

2. 黄体酮注射液的药理作用及适应症

天然孕激素类药物（progestogens）主要由卵巢黄体分泌，妊娠3~4个月后，黄体逐渐萎缩而由胎盘分泌代之，直至分娩。在近排卵期的卵巢及肾上腺皮质中也有一定量的孕激素产生。由黄体分离出的天然孕激素为黄体酮含量很低。临床应用的孕激素类药物是人工合成品及其衍生物^[2]。本品为孕激素类药物，具有孕激素的一般作用。在月经周期后期能使子宫内膜分泌期改变，为孕卵着床提供有利条件，在受精卵植入后，胎盘形成，可减少妊娠子宫的兴奋性，使胎儿能安全生长。在与雌激素共同作用时，可促使乳房发育，为产乳做准备。本品可通过对下丘脑的负反馈，抑制垂体前叶促黄体生成激素的释放，使卵泡不能发育成熟，抑制卵巢的排卵过程^[3]。

黄体酮口服后在胃肠及肝迅速破坏，效果差，故采用注射给药。可用于以下症状：先兆流产，一般10~20mg，用至疼痛及出血停止；习惯性流产史者，自妊娠开始，一次10~20mg，每周2~3次；功能性子宫出血，用于撤退性出血血色素低于7mg时，一日10mg,连用五天，或一日20mg连续三至四天；闭经，在预计月经前8~10天，每日肌注10mg,共5天或每日肌注20mg3~4天；经期前紧张综合征，在预计月经前12天注射10~20mg,连续10天^[4]。

3. 黄体酮注射液不良反应

黄体酮是油性注射剂，使用过程中注射方法，注射用量和注射部位等因素均能影响到药物的吸收^[5]。该药在注射部位吸收缓慢，极易形成硬结或无菌性囊腔而引起注射部位感染；且反复多次注射容易引起局部药物吸收不良、蓄积，而发生皮肤红肿、结节，伴有瘙痒及疼痛（注射反应）。有研究显示，黄体酮肌内注射不良反应发生率与患者用药剂量有直接关系；每次注射20mg,不良反应发生率为34.7%；每次注射10mg,不良反应发生率为3.8%^[6]。黄体酮注射剂的辅料为注射用油，辅料溶剂的品质和用量均会影响药品的质量。而有一些黄体酮注射剂辅料中除了注射用油，还含有苯甲醇成分，国家食品药品监管局还曾发出通知，鉴于反复注射苯甲醇可引起臀肌挛缩症，要求加强苯甲醇注射液管理，不良反应项增加”反复肌肉注射本品可引起臀肌挛缩症”。黄体酮注射剂发生不良反应除了与药物剂量和使用时间相关，辅料也是一种不可忽视的因素^[7]。不良反应包括恶心、头晕、头痛、倦怠感、荨麻疹、乳房肿胀、长期连续应用可月经减少或闭经、肝功能异常、浮肿、体重增加等。本品严重肝损伤患者禁用（使症状恶化）^[8]。

4. 局部毒性试验概述

定义：局部毒性是指某些药物在机体接触部位直接造成的损害作用。其最初表现为直接接触部位的细胞死亡。主要包括刺激性试验、过敏性试验、溶血性试验^[9]。

刺激性试验：刺激性是指非口服给药制剂给药后对给药部位产生的可逆性炎症反应，若给药部位产生了不可逆性的组织损伤则称为腐蚀性。刺激性试验是观察动物的血管、肌肉、皮肤、黏膜等部位接触试物后是否引起红肿、充血、变性或坏死等局部反应。

过敏性试验：又称超敏反应，指机体受同一抗原再刺激后产生的一种表现为组织损伤或生理功能紊乱的特异性免疫反应，是异常或病理性免疫反应。

溶血性试验：是指药物制剂引起的溶血和红细胞凝聚等反应。溶血性反应包括免疫性溶血与非免疫性溶血^[10]。

5. 肌肉刺激性实验方法

实验对象：新西兰兔；每组不少于3只。应设生理盐水对照或/和溶媒对照组，可采用同体左右侧自身对比法。根据受试物的特点和刺激性反应情况选择观察时间, 观察期结束时应对部分动物进行组织病理学检查。分别在左右两侧股四头肌内注射给药，观察给药后不同时间的局部反应，如充血、红肿等。给药后48～72小时剖检观察注射局部的刺激反应，按表1计算相应的反应级，并进行局部组织病理学检查，提供病理照片。

根据表1计算肌肉刺激性总反应级，计算平均值，按表2判定刺激等级。若各股四头肌反应级的最高与最低之差大于2，应另取动物重新试验。

表1 肌肉刺激反应分级标准^【11】

表2 平均分值和等级

6.实验部分

实验目的：

通过对新西兰兔股四头肌单次注射给与黄体酮注射液，检测其潜在的肌肉刺激性，并通过7天恢复期观察，评估对肌肉刺激性的可逆性，并与市售对照品进行比较，为临床试验提供参考^[12]。

实验内容：

1. 新西兰兔订购、分组

2. 供试品的给药

3. 给药后动物症状观察

4. 取材、病理标本制作、阅片

5. 综合肉眼观察结果与病理组织学检查结果判定肌肉的刺激情况

实验要求：

1 、掌握文献查阅的一般方法，学会使用计算机在中国期刊网，维普数据库，超星数字图书馆，美国化学委员会（ASA）数据库，CA,SCI等检索资源上查阅关于黄体酮注射液的相关文献。

2、掌握新西兰兔保定方法^【13】。

3 、熟悉病理部门仪器的基本操作^[14]。

4、熟练掌握新西兰兔股四头肌注射给药方式^[15]。

5、熟悉病理标本制作过程^[16]。

总结：

通过研究黄体酮注射液对新西兰兔肱四头肌的实验，分析黄体酮注射液对肌肉刺激性大小，为临床用药提供参考。

参考文献

[1]孙赟,刘平,叶虹,伍琼芳,刘欣燕,杨慧霞,李蓉,乔杰.黄体支持与孕激素补充共识[J].生殖与避孕,2015,35(01):1-8.

[2]王亚平,邓珊,王阳,孙爱军,薛晴,张巧利.性激素类药物在妇科内分泌疾病中的临床应用推荐#8212;#8212;孕激素篇[J].实用妇科内分泌电子杂志,2015,2(01):1-7 201.

[3]叶静,陈秋菊,何雯,张洁,叶红娟,傅永伦,吕祁峰,匡延平.孕激素对促排卵过程中抑制素水平的影响[J].中华生殖与避孕杂志,2017,37(11):874-882.

[4]郑新,秦小莲,王缉义,刘福,卢安妮.黄体酮在妇产科外领域的研究及临床应用进展[J].中国药房,2016,27(16):2292-2295.
[5]姚小东,宁美英.黄体酮给药系统的研究进展[J].中国计划生育学杂志,2014,22(12):855-858.

[6]孙青苗,金彦,陈捷,沈浣,蔡林.肌肉注射黄体酮致局部不良反应相关因素分析[J].中国药物应用与监测,2009,6(05):300-302.

[7]刘小清,刘婕,龙凯欣,胡玉维,钟华琴,陆卫萍,雷招宝.黄体酮制剂的不良反应与临床合理用药[J].医学理论与实践,2015,28(20):2836-2838.

[8]刘小清,刘婕,龙凯欣,胡玉维,钟华琴,陆卫萍,雷招宝.黄体酮制剂的不良反应与临床合理用药[J].医学理论与实践,2015,28(20):2836-2838.

[9]刘婵,茹丽,袁征,关业枝,徐勤.局部毒性试验质量保证之细节浅谈[J].中国药理学与毒理学杂志,2013,27(03):524.

[10]国家食品药品监督管理局.药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则.2014年5月

[11]吴彦霖,王萍萍,张媛,吴桂艳,高华.细化和规范化肌肉刺激性试验方法的建议[J].中国新药杂志,2016,25(16):1838-1844.
[12]杨春燕.家兔注射CJ006血管及肌肉刺激性[A]. 中国毒理学会、广东省疾病预防控制中心.中国毒理学会第六届全国毒理学大会论文摘要[C].中国毒理学会、广东省疾病预防控制中心:,2013:2.

[13]Fiona J. Li,Elham Nili,Cora Lau,Neil A. Richardson,Jennifer Walshe,Nigel L. Barnett,Brendan G. Cronin,Lawrence W. Hirst,Ivan R. Schwab,Traian V. Chirila,Damien G. Harkin. Evaluation of the AlgerBrush II rotating burr as a tool for inducing ocular surface failure in the New Zealand White rabbit[J]. Experimental Eye Research,2016,147.

[14]颜亚晖. 病理常规制片常用仪器设备的管理及使用[A]. 中华医学会病理学分会.中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C].中华医学会病理学分会:,2006:2.

[15]林小琪.家兔肌肉注射NP78天反复给药毒性试验[A].中国毒理学会药物毒理与安全性评价专业委员会、中国药学会药物安全评价研究专业委员会、中国药理学会药物毒理专业委员会.首届中国药物毒理学年会（2011年）暨国际药物非临床安全性评价研究论坛论文集[C].中国毒理学会药物毒理与安全性评价专业委员会)、中国药学会药物安全评价研究专业委员会)、中国药理学会药物毒理专业委员会:,2011:2.

[16]宋彬妤.对制作高质量病理标本的方法研究[J].当代医药论丛,2015,13(23):12-13.

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

本品为无色澄明液体，略有粘性，用于月经失调，如闭经和功能性子宫出血、黄体功能不足、先兆流产和习惯性流产（因黄体不足引起者）、经前期紧张综合征的治疗。

本实验通过对新西兰兔股四头肌单次注射给予黄体酮注射液，检测其潜在的肌肉刺激性，并通过7天恢复期观察，评估对肌肉刺激性的可逆性，并与市售对照品进行比较，为临床试验提供参考。

1、文件查阅 掌握文件查阅的一般方法，学会使用计算机在中国期刊网，维普数据库，超星数字图书馆，美国化学委员会（asa）数据库，ca,sci等检索资源上查阅关于黄体酮注射液的相关文献。