摘 要

金银花是一种常见的植物，它有抗肿瘤，抗高血脂等功效，也是一种常见的中药材，有效成分绿原酸是金银花能够所以具备这些功效的主要原因，绿原酸是植物有氧呼吸戊糖途径中产生的次生代谢化合物。因为绿原酸有众多的药理活性，使得绿原酸被广泛的使用到保健食品、日用化工这些领域方面，本实验采用改性大孔树脂来对金银花中绿原酸进行分离纯化，并对其吸附与解吸条件进行实验探索。结果显示在pH为3.0，乙醇浓度为70%，上样速度为0.4 ml/mg，NKA-2-IL型树脂高径比为30: 1，洗脱速度为0.6 mL/min等条件下，使用NKA-2-IL树脂分离纯化金银花粗提液中的绿原酸，经HPLC检测得，绿原酸类 物质的纯度为91.2%，其中绿原酸纯度由原来的5.13%提高到69.08%，得率为89.5%，异绿原酸物质纯度为22.12%。结果表明NKA-2-IL大孔树脂对绿原酸的提取纯化效果较文献报道的纯度明显提高。

关键词： 金银花 绿原酸 离子液体 改性树脂

ABSTRACT

Honeysuckle is a common plant and it has anti-tumor, anti-hyperlipid and other effects, the effective ingredient of chlorogenic acid is the main reason why honeysuckle can have these effects. chlorogenic acid is plant aerobic Respiratory secondary metabolic compounds produced in the pentose pathway because of its pharmacological activities. chlorogenic acid is widely used in the fields of health foods and daily-use chemicals. In this experiment, modified macroporous resin was used to separate and purify chlorogenic acid from honeysuckle. The adsorption and desorption conditions were explored experimentally. The results showed that the pH was 3.0, the ethanol concentration was 70%（v/v）, the sample rate was 0.4 ml/mg, the aspect ratio was 30: 1 and the elution rate was 0.6 mL/min. The purity of chlorogenic acid was 91.2%, and the purity of chlorogenic acid was increased from 5.13% to 69.08%. The yield was 89.5%, the purity of the isochlorogenic acid material was 22.12%. The results showed that the purification of chlorogenic acid by NKA-2-IL macroporous resin was significantly improved compared with that reported in the literature.

KEYWORDS：honeysuckle; Chlorogenic acid; Ionic liquid; Modified resin

目录

摘要 I

ABSTRACT II

第一章 文献综述 1

1.1 绿原酸理化性质 1

1.2绿原酸的提取方法 1

1.2.1水提醇沉法 1

1.2.2 利用超声波提取 2

1.2.3 通过微波来进行辅助提取的方法 2

1.2.4 通过超高压进行提取的方法 2

1.2.5 生物酶提取 3

1.3 绿原酸几种常用的分离方法 3

1.3.1 树脂分离法 3

1.3.2 膜分离技术 4

1.3.3 环糊精键合凝胶介质分离法 4

1.4 几种吸附树脂改性方法介绍 4

1.5 绿原酸的检测方法 5

1.5.1 紫外分光光度法 5

1.5.2 高效液相色谱法 5

2.1 实验材料 6

2.1.1 实验仪器 7

2.2 实验方法 7

2.2.1 色谱条件的建立 7

2.2.2 高效液相色谱法标准曲线的制作 8

2.2.3 大孔树脂的筛选 9

2.2.4 树脂的预处理过程 9

2.2.5 绿原酸供试液的制备 9

2.2.6 各型号树脂静态吸附率和吸附量的计算 10

2.2.7 计算树脂静态解吸率 10

2.2.8 NKA-2树脂的氯甲基化 11

2.2.9 NKA-2-Cl树脂的离子液体改性 12

2.3 NKA-2-IL树脂的静态吸附与解吸条件优化 14

2.3.1 pH值对吸附特性的影响 14

2.3.2 乙醇的浓度对饱和树脂解吸性能的影响 14

2.4 NKA-2-IL树脂的动态吸附与解吸条件优化 14

2.4.1 不同的高径比对树脂吸附的影响 15

2.4.2 洗脱速度的影响 15

2.4.3 上样速度对吸附过程的影响 15

第三章 实验结论与讨论 16

3.1 各型号树脂静态吸附率和吸附量 16

3.2 NKA-2-IL树脂的静态吸附量及解吸率测定 17

3.3 NKA-2-IL树脂纯化绿原酸条件的优化 18

3.3.1 pH值对改性NKA-2-Cl树脂吸附量的影响 18

3.3.2 乙醇浓度对改性NKA-2-Cl型树脂解吸率的影响 18

3.3.3 上样流速对改性NKA-2-Cl型树脂吸附性能的影响 19

3.3.4 高径比对NKA-2-IL型树脂吸附性能的影响 20

3.3.5 洗脱速度对改性NKA-2-Cl树脂解吸性能的影响 21

3.3.6 NKA-2-IL大孔树脂对绿原酸的分离纯化结果 21

参考文献 22

致谢 24

第一章 文献综述

绿原酸，被称为“植物黄金”，又名氯原酸，是植物体有氧呼吸中戊糖途径产生的一种次生代谢产物。绿原酸所具有的抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降血压、降血脂、增加白血球、清除自由基和兴奋中枢神经系统^[1]等药理活性使它成为了生物活性物质研究领域的热点^[2],但是目前绿原酸的分离纯化手段还不够完美，在提取分离过程会出现金银花浪费，绿原酸纯度较低等问题，为了解决这些问题，本研究拟用改性大孔树脂来分离纯化金银花中的绿原酸，并优化工艺条件，以期能够提升分离纯度。

1.1 绿原酸理化性质

绿原酸结构如下图。常温时在水中的溶解度仅仅为4％，但绿原酸在热水中的溶解度相对高一些，溶于乙醇、乙酮，微溶于乙酸乙酯，不溶于氯仿、乙醚和二硫化碳^[3]。绿原酸分子具有多元酚，酯键以及不饱和的双键等不稳定的部分，故绿原酸在加热，光照等条件下均易发生氧化分解^[4]。绿原酸供试液应避免高温、光照，保存在阴凉避光处。

1.2绿原酸的提取方法

1.2.1水提醇沉法

董丽华等^[5]称取适量的金银花粉然后量取10倍量的去离子水保持搅拌加热2h,然后冷却至室温后过滤，然后将滤渣移到干净的烧杯之中，用量筒量取8倍的去离子水，加热处理一段时间再过滤，然后收集提取液混合，浓缩加热，通过加入乙醇来使醇含量增加到75%，由于醇含量的增加会使得溶液中不溶于春的部分析出，从而达到分离绿原酸的目的。安静放置30min、然后过滤，降低压强来浓缩使其抽干。实验最终结果显示，金银花中提出物平均的得率为29.0%，而其中绿原酸平均含量为19.8%，计算可得绿原酸的得率达到了8.7%。

1.2.2 利用超声波提取

超声提取法是通过超声波的高速、搅拌作用和空化作用等破坏细胞加速胞内物质的释放，提高提取率的一种提取方法^[6]。

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