文 献 综 述

前言

磷是植物生长发育所必需的重要营养元素之一，如何能使土壤中的磷成为有效磷是当前国内外非常关注的研究领域^[1]。土壤中存在许多微生物，能够将植物难以吸收利用的磷转化为可吸收利用的形态，具有这种能力的微生物叫做解磷菌或溶磷菌^[2]。土壤中的微生物为磷素在土壤、植物间的循环提供了动力，土壤中微生物的特定活动对土壤中有效态磷含量的增加有促进作用^[3]。此外，解磷菌不仅能提高土壤中磷的利用率，而且其降解产物农业、生产、生活有重要意义。为此，本文就一株解磷菌以磷酸苯二钠（C₆H₅O₄P#183;2H₂O）为唯一磷源对其降解产物进行定性及定量分析。

1.发酵液的预处理

发酵液的成分复杂，其中包含有菌体、胞内及胞外生物代谢产物、胞内的细胞物质及剩余的培养基残分等，若不对其进行处理，则会影响后序操作，造成实验出现偏差。发酵液多为悬浮液，粘度大，不易过滤；目标产物在发酵液中的浓度通常较低，其中发酵液杂质对分离提取影响最大的是高价无机离子和水溶性杂蛋白。发酵液的预处理最终使其物理性质改变，提高固液分离的效率。

1.1絮凝和吸附

壳聚糖是一种新型的高分子絮凝剂。海藻酸钠是一种天然多糖，具有很好的浓缩溶液、形成凝胶和成膜的能力，与絮凝剂壳聚糖结合使用，具有很好的助凝能力^[4]。壳聚糖呈阳离子型，通过”桥架”作用和压缩胶体双电层结构而絮凝，对于带负电荷的菌体、蛋白具有很好的絮凝效果。对于蛋白、色素和多糖等大分子物质，超滤有很好地去除效果。在超滤前，先进行絮凝、离心和吸附，大部分悬浮物被去除，在一定程度上减轻了超滤膜的污染问题^[5]。

1.2超滤

聚砜中空纤维超滤膜组件两支,一支组件超滤膜的截留分子量为30000～40000,简称粗膜(内压膜,膜面积为0.3 m²),另一支组件超滤膜的截留分子量为8000～10000,简称细膜(外压膜,膜面积为1.5 m²)^[6]。

2.降解产物的分析

2.1定性及半定量分析

利用GB/T 8313-2008对产物进行定性及半定量分析。用福林酚试剂比色法测定酚类总量，在刻度试管中加入1.0 mL的测试夜和5.0 mL福林酚试剂，摇晃均匀，静置3-8 min，加入4.0 mL7.5%Na₂CO₃,再加水至刻度线，60 min后，用紫外分光光度计在765 nm处测定吸光值。

2.2定量分析#8212;#8212;高效液相色谱法

苯酚是最简单的酚，为无色固体，有特殊气味，显酸性。苯酚是有机化工工业的基本原料，可通过多种途径对环境水体造成污染，对人类、鱼类以及农作物带来严重危害。根据国家环保部门有关规定，工作场所苯酚的最高允许质量浓度为5#215;10 ^{- 6} μg/ L，饮用水中为2 μg/ L，地面水中为0.1 mg/ L。苯酚的测量方法有多种，如溴化容量法、比色法、高效液相色谱法等。但前两种方法分析速度较慢、精度较低，高效液相色谱法是近年来发展起来的一种新技术，具有分析速度快、检测灵敏度高、操作简便、样品用量少等特点。

高效液相色谱法由于具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度和选择性高的特点, 特别适合于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离和分析, 在全部有机化合物中, 有20%的样品适用于气相色谱分析, 而80%的有机化合物可用高效液相色谱法分析^[7]。

2.2.1 高效液相色谱法的应用^[22]

高效液相色谱法的应用远远广于气相色谱法。它广泛用于合成化学、石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域。

HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。其在生化领域的应用主要集中于两个方面：1.低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。2.高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等）的纯化、分离和测定。