1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

1.1 蔗糖异构酶

蔗糖异构酶（又称异麦芽酮糖合成酶，siase）是催化蔗糖异构为异麦芽酮糖（6-o-α-d-吡喃葡糖基-d-果糖，isomaltulose）和海藻酮糖（1-o-α-d-吡喃葡糖基-d-果糖，trehalulose）的关键酶。siase的主要来源是细菌，沙雷氏杆菌（serratia plymuthid）、大黄欧文菌（erwiniarhapontici）、肠杆菌属（enterobactersp.）、红色精朊杆菌（protaminobacterrubrum）、多源发散菌（pantoea dispersa）、克雷伯氏杆菌属（klebsiellasp.）、放射性土壤杆菌（agrobacterium radiobacter）以及嗜中酸假单胞菌（pseudomonas mesoacidophila）等均能产生siase^[10]。还存在一种来源于昆虫类（silverleaf whitefly）的siase，其催化蔗糖生成的产物只有海藻酮糖^[6]。根据酶催化主产物的种类，分为异麦芽酮糖主产型^[1]（70%~85%）和海藻酮糖主产型^[7](85%~95%)。siase最适反应温度大都在20～40 ℃。一般来说，反应温度越高，反应速度就越快。但高温（50 ℃以上）会加剧蔗糖的水解反应，生成葡萄糖和果糖。siase的最适ph值在5.5～7.0之间^[11]。

1.2 异麦芽酮糖

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1研究内容

(1)本研究对运用amber 12计算酶与产物的结合自由能，并将其分解得出每个氨基酸残基对产物结合自由能的贡献值，找到贡献值相对最大或最小的氨基酸残基进行定点突变。

(2)本研究对突变体进行出纯化，并对其酶学性质进行了研究，考察了ph和温度对酶活力的影响；考察了蔗糖异构酶的热稳定性和ph稳定性；确定了蔗糖异构酶的km和v_max，并对其产物分布进行分析。