论文总字数：19344字

摘 要

三氯生（Triclosan，简称TCS）是一种人工合成的氯化芳香族化合物，作为抗菌剂、消毒剂被广泛应用于个人护理品、食品设备消毒及家具清洁用品等。大量研究发现TCS及其衍生物具有亲脂性，生物累积性较强和环境持久性等特点，同时已证实TCS对水生生物、哺乳动物有轻度致畸性，并对肌肉功能造成损伤严重危害，甚至通过食物链威胁人类健康。

莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）是水环境中主要初级生产者，对水生生态系统的平衡起到重要的作用，也是评价外源化学物对水体环境影响的重要模式生物。因此，研究TCS对莱茵衣藻的毒性反应有一定的现实意义。本论文研究了不同浓度的三氯生胁迫下，莱茵衣藻体内超氧阴离子（O₂^-●）与过氧化氢（H₂O₂）含量，以及抗氧化酶系活力和其编码基因表达的变化反应。结果显示，O₂^-●含量和超氧化物歧化酶（SOD）与抗坏血酸氧化酶（APX）活力及其编码酶基因的表达都随着TCS处理浓度的升高而明显增大，表明三氯生对莱茵衣藻的产生了一定的毒性作用，也客观反应三氯生对水生态环境的影响。

关键词：三氯生 莱茵衣藻 氧化胁迫 抗氧化酶系

The study on the oxidative stress of triclosan in Chlamydomonas reinhardtii

Abstract

Triclosan (TCS), a synthetic chlorinated aromatic compound, are widely applied in personal care products, food industrial equipment and furniture as an antibacterial agent. Numerous studies have reported that TCS and its derivatives posed to be lipophilicity, high bioaccumulation and environmental persistence. Additionally, it has been demonstrated that TCS was teratogenic to aquatic organism and mammals, which affected harmfully their muscle function. TCS is potential to threaten human health via the food chain.

Chlamydomonas reinhardtii (C. reinhardtii) is an essential primary producer in aquatic environment., which play important roles in water ecosystem. Thus, study on the biotoxicity of TCS to have realistic sense. Herein, the contents of superoxide anion (O₂^-●) and hydrogen peroxide (H₂O₂), the activities of antioxidant enzymes and their genes expressions were determined in TCS-exposed C. reinhardtii. The results displayed that the content of O₂^-● and the activities of SOD and APX were increase as the enhancement of TCS concentration, which suggested that TCS affect toxically the growth of C. reinhardtii.

Key Words：Triclosan；Chlamydomonas reinhardtii；Oxidative stress；Antioxidant enzymes

目 录

摘 要 I

Abstract II

目 录 III

第一章 文献综述 1

1.1 前言 1

1.2三氯生概况 2

1.2.1 三氯生的基本性质 2

1.2.2 三氯生与环境 2

1.3 莱茵衣藻 3

1.4 活性氧与氧化胁迫 4

1.4.1 氧化胁迫原理 4

1.4.2 抗氧化酶系 4

1.5 课题选择 5

1.6 研究途径 6

第二章 实验部分 7

2.1 药品与仪器 7

2.2 实验方法 8

2.2.1 莱茵衣藻的培养 8

2.2.2 莱茵衣藻的传代和保存 9

2.2.3 三氯生的配制 10

2.2.4 加药处理莱茵衣藻 10

2.2.5 粗酶液的提取 10

2.2.6 蛋白含量测定 11

2.2.7 H₂O₂产生的可视化 11

2.2.8 H₂O₂含量的测定 12

2.2.9 超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase, SOD）酶活力测定 12

2.2.10 抗坏血酸过氧化酶（Ascorbate peroxidase, APX）酶活力测定 12

2.2.11 过氧化氢酶（CAT）酶活力测定 13

2.2.12实时荧光定量PCR 13

2.2.13 数据处理和统计分析 14

第三章 实验结果与讨论 15

3.1 不同浓度三氯生对莱茵衣藻中H₂O₂可视化的研究 15

3.1.1 结果 15

3.1.2 讨论 16

3.2不同浓度三氯生对莱茵衣藻中H₂O₂含量的影响 17

3.2.1 结果 17

3.2.2 讨论 18

3.3不同浓度三氯生对莱茵衣藻中SOD、APX、CAT酶活力的影响 19

3.3.1不同浓度三氯生对莱茵衣藻中SOD酶活力的影响 19

3.3.2不同浓度三氯生对莱茵衣藻中APX酶活力的影响 20

3.3.3不同浓度三氯生对莱茵衣藻中CAT酶活力的影响 20

3.3.4 讨论 21

3.4 不同浓度的三氯生处理下几种编码重要抗氧化酶基因的响应情况 22

全文总结 24

创新点 25

存在问题 26

参考文献 27

致 谢 29

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