COI基因和cytb基因在鉴定烤鳕鱼中鱼类物种组成上的比较分析开题报告
2020-06-03 22:06:41
1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）
1.1 鳕鱼的营养价值
鳕鱼，又名大口鱼、大头青、狭鳕、明太鱼，一般指鳕科鱼的全体，为海洋深水鱼，是底层冷水性群聚鱼类。鳕鱼肉质厚实，细剌极少，肉味甘美。鳕鱼肉中蛋白质含量达到16.8%，比带鱼、三文鱼、鲳鱼、鲥鱼都高。而鳕鱼肉中所含脂肪和鲨鱼一样，只有0.5%，要比三文鱼低17倍，比带鱼低7倍。每100g鳕鱼可食部分含热量88.1kcal，蛋白质20.4g，钾321mg，钠130mg，钙 42 mg，镁84 mg，硒24.8μg，磷232mg，维生素a14μg，烟酸2.7mg，胡罗卜素1.2μg[1]。
鳕鱼的肝脏含油量高，除了富含普通鱼油所有的dpa、dha外，还含有人体所必需的维生素a、d、e和其他多种维生素。鳕鱼肝油中这些营养成分的比例，正是人体每日所需要量的最佳比例。因此，北欧人将它称为餐桌上的”营养师”。
2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
2.1 主要研究内容
（1）市场采集的共153份烤鳕鱼片样品的DNA提取
（2）通用引物扩增COI基因和cytb基因片段
（3）COI基因和cytb基因序列片分析
2.1主要研究手段
（1）DNA的提取
取约200mg肌肉组织于2ml圆底离心管中，加入200micro;l 组织裂解液（500 mM Tris-HCl pH 8.0, 100 mM EDTA, 100 mM NaCl, 2% SDS）和200micro;l磷酸盐缓冲液（300 mM pH 8.0），用无菌手术剪刀将肌肉组织剪碎。再向该离心管中加入20micro;l蛋白酶K（20mg/ml），并将离心管置于65℃恒温水浴锅裂解60min。裂解结束后，14000g离心5min，吸取上清液并转入新的2ml圆底离心管。加入0.5倍体积的乙酸钠溶液（4M, pH 8.0），振荡混匀，14000g离心5min，吸取上清液并转入新的2ml圆底离心管。再加入0.5倍体积的乙酸钠溶液，振荡混匀，14000g离心5min，吸取上清液并转入新的1.5ml尖底离心管。加入0.6倍体积的异丙醇，振荡混匀，静置5min后14000g离心10min，弃去上清液。加入800micro;l 70% 乙醇，振荡混匀，14000g离心3min。弃去上清液，再加入800micro;l 100%乙醇，振荡混匀，14000g离心3min，弃去上清。75℃烘箱烘干后加入30micro;l 灭菌超纯水溶解DNA，并置于-20℃贮藏。DNA的浓度和纯度（A260nm/A230nm和A260nm/A280nm）用核酸蛋白测定仪测定，并稀释至100ng/micro;l备用。DNA的完整性通过1%琼脂糖凝胶电泳检测。
（2）COI基因和Cytb基因通用引物序列（表1）
表1 COI基因和Cytb基因通用引物序列
|
Primer name |
Primer sequence (5′-3′) |
目标基因 |
|
FISHCOILBC_ts |
CACGACGTTGTAAAACGACTCAACYAATCAYAAAGATATYGGCAC |
COI |
|
FISHCOIHBC_ts |
GGATAACAATTTCACACAGGACTTCYGGGTGRCCRAARAATCA | |
|
C-CB280F |
CACGACGTTGTAAAACGACTGCATTTACGCCCACATTGGCCGAGG |
Cytb |
|
C-CB431R |
GGATAACAATTTCACACAGGGTGGCCCCTCAGAAGGACATTTGGCC | |
|
M13F (-21) |
CACGACGTTGTAAAACGAC |
NA |
|
M13R (-27) |
GGATAACAATTTCACACAGG |
（3）采用Mega 5.0对序列进行分析
