文 献 综 述 L-苹果酸是自然界中广泛存在的一种天然有机酸，也是TCA 循环中的重要一员，在食品、医药和化工等领域应用广泛[1], 具有良好的市场前景。

其生产方法[2]主要有化学合成法、酶催化法和微生物发酵法，其中微生物发酵法因其原料来源广、成本低、工艺条件温和、产品质量稳定以及生产方式绿色环保等优势，被认为是最有前景的一种生产方式，因此成为近年来的研究热点。

Battat等首次发现黄曲霉（Aspergillus f lavus）可以利用糖质原料直接发酵生产L-苹果酸，并对其发酵条件进行优化后， L-苹果酸产量达到113 g/L，产率达到1.26 mol/mol葡萄糖[3]。

然而该菌株在发酵过程中会产生黄曲霉毒素而限制了其应用。

除了黄曲霉外，黑曲霉（Aspergillus niger）ATCC10577 [4] 和米曲霉（Aspergillus oryzae）NRRL3488 [5]也能积累17g/L30.27g/L L -苹果酸。

此外，酵母属中的耐糖鲁氏酵母（Zygosaccharmyces rouxxi）[6]也能大量积累L-苹果酸，产量为74.9 g/L、糖酸转化率为32.8%。

遗憾的是，野生型菌株由于存在发酵周期长、发酵条件难以控制以及霉菌的菌丝易结球等问题，对其在工业上的广泛应用造成了限制。

通过基因工程手段构建的 L-苹果酸生产菌可消除副产物的影响，引导代谢流更多地流向目标产物。

大肠杆菌因遗传背景清楚，并且经改造已成功生产如乳酸、琥珀酸等产品，开始被国内外学者关注，用于构建 L-苹果酸生产菌[7]。

1、L-苹果酸合成 有氧条件下，苹果酸作为三羧酸循环（TCA）中一个重要的中间代谢物，会很快转化为草酰乙酸而被消耗，因此培养基中并没有苹果酸积累。