文 献 综 述

摘要：

莱鲍迪甙A(Rebaudioside A，RA甙)是一种无毒、安全、低热能、高甜度的天然甜昧剂，口味纯正，没有后苦味，。目前国内外主要运用利用酶的催化作用，在ST甙和RA甙上增加特定基团如葡萄糖基（Glc）或果糖基（Fru）单元，以使口味更接近与蔗糖，酶改性甜菊糖甜度为蔗糖的100倍左右。根据代谢流理论分析，要想提高RA甙产量，得提高UDP-糖基转移酶的酶活。为了有效表达外源基因（UGTs),可以通过额外的添加酵母组成型的强启动子如：Ppgk、Padhi、Pgpd到酵母PESC 载体上来实现。

1.酿酒酵母表达系统

酿酒酵母在食品工业、词料工业等应用已有了几千年的悠久历史,可以说是GRAS (generally recognized as safe)生物。酵母也是被用作研究真核生物的模式生物。酿酒酵母的遗传背景十分清楚,因此酿酒酵母会是理想的真核表达宿主菌。酿酒酵母表达系统优点有很多:酿酒酵母生长繁殖迅速,生物量高,培养条件粗放,工艺简单,对表达的蛋白具有一定的翻译后加工能力，不产生毒素,安全可靠,如外源蛋白质折叠加工和糖基化修饰,这有利于保持重组蛋白的活性和稳定性。利用酿酒酵母为宿主系统表达的生物产物很多。

2.1表达载体

构建高效的表达载体是酵母遗传改良的前提。据复制的性质酵母表达载体主要分为自主复制的游离质粒载体和随染色体同步复制的整合型载体两类。酵母的载体通常含有细菌质粒、酵母质粒和染色体组分,能往返于细菌和酵母两种宿主,故称为穿梭载体。

2.1.1 整合型载体

整合型载体不含酵母的DNA复制起始区,不能在酵母中进行自主复制,含有整合介导区。载体能通过同源重组,即利用载体上的DNA片段与染色体相应区段发生重组,从而把载体整合到酵母染色体上,获得稳定的转化子。按其介导整合方式的不同,可以分为单拷贝整合载体和多拷贝整合载体。

早期的酿酒酵母整合型载体的同源整合位点是营养标记基因片断,而营养标记基因在酿酒酵母基因组中没有重复序列,所以早期的Yip属于低拷贝整合载体;同时早期Yip要求宿主菌必须是营养缺陷型才能有效蹄选转化子,而生产上应用的酿酒酵母都不是营养缺陷型,所以营养缺陷蹄选标记不适用于工业酿酒酵母进行的基因操作。另一方面,营养缺陷型酿酒酵母底物利用范围狭窄,对培养条件要求高,产酒精能力弱,不具有应用价值。工业酿酒酵母则能适应较苟刻的培养条件,且酒精发酵力强,因而目前正成为被遗传改良的主体。