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摘 要

小肽在蛋白质营养中有着重要的作用。随着蛋白质和氨基酸营养研究的深入，人们已逐渐认识到肽营养的重要性。目前多肽固相合成技术已经成为多肽合成中的一种常规技术，在药物研究领域、蛋白质结构研究领域、免疫学研究领域呈现着不可比拟的优越性。其中Fmoc固相法得到广泛的应用。介绍了Fmoc策略合成小肽的原理、过程及进展。

关键词：小肽 固相合成 Fmoc固相合成

Process of solid phase synthesis of small peptides

Abstract

Small peptides play an important role in protein nutrition. With in-depth study of protein and amino acid nutrition, people have come to realize the importance of nutrition peptide. Currently solid phase peptide synthesis has become a conventional peptide synthesis techniques, it presents the incomparable superiority in the fields of drug research, the study of protein structure, and immunology research. Fmoc solid-phase method is widely used. This article describes the principles, processes and progress by the use of Fmoc solid phase synthesis to Synthetic peptide.

Key Words: Small peptide; Solid-phase synthesis; Fmoc solid phase synthesis

目 录

摘 要 Ⅰ

Abstract Ⅱ

第一章 文献综述 1

1.1概述 1

1.2多肽类药物及保护氨基酸市场前景 1

1.3多肽固相合成技术 3

1.3.1多肽的固相合成原理 3

1.3.2 固相多肽合成中常用树脂 4

1.3.3 氨基酸与固相载体的连接 4

1.3.4缩合试剂的选择 5

1.3.5 载体上第一个氨基酸含量的测定 8

第二章 实验的材料与分析方法 9

2.1试验仪器 9

2.2实验试剂 9

第三章 实验方法 16

3.1 实验方法 16

3.2 实验过程 16

3.2.1 Fmoc-ser-Wang树脂复合物的制备 16

3.2.2 肽链的延长 17

3.2.3四氯对苯醌定性法的建立 17

3.2.4 肽链的切割 17

3.2.5 HPLC检测方法 17

第四章 结果与讨论 14

4.1 Fmoc标准曲线的测定 14

4.2 反应搅拌方式对连接率的影响 14

4.3 缩合剂的选择对连接率的影响 14

4.4 反应溶剂体系对连接率的影响 15

4.5 反应时间对连接率的影响 16

4.6反应投料比对连接率的影响 16

第五章 结论与展望 18

5.1 结论 18

5.2 展望 18

参考文献 19

致 谢 21

第一章 文献综述

1.1概述

多肽是由多种α-氨基酸依据特定的排列次序通过肽键连接而成的化合物，其分子量介于氨基酸和蛋白质之间，它是一种与生物体内各种细胞机能密切相关的生物活性物质。

图1-1 肽键与肽

二十世纪初叶，美国科学家Fischer首次将两个甘氨酸合成为二肽物质Gly-Gly，以此拉开了整个生命科学界对于多肽研究的序幕[¹]。

多肽类药物和传统的药物相比具有的原料易制备[²]、疗效显著、毒副作用小[³]、选择性和特异性好等特点[⁴]，但是稳定性不理想，需要做一些必要的修饰来改善稳定性，提高疗效[⁵]。

美国知名科学家、诺贝尔奖获得者朱棣文博士在谈到21世纪的生物工程时，曾说，“21世纪的生物工程就是研究基因工程与蛋白质工程，21世纪是多肽的世纪。”

随着近年来多肽药物成为新药研发的热门领域，保护氨基酸也引起了关注。保护氨基酸在多肽合成领域是最基础的工作：在小肽合成中，为了获得质量合格的目的肽链，首先需要对氨基酸主链和侧链的活性基团加以封闭或保护，。

在多肽合成中，为了避免副反应的发生，首先把有可能参与反应的其他活性基团加以保护，同时反应结束，又需要切除这些活性基团的保护基。通过这样合理保护基选择策略，可以有效的提高合成产物的产率与纯度。

1.2多肽类药物及保护氨基酸市场前景

1962年，Merrifield创立了固相多肽合成法[⁶]，自此以保护氨基酸为原料的固相合成以其独特的的优势引起了人们的注意。在此后，多肽合成不断发展，肽链的长度从短肽链发展至长肽链，合成规模和涉足领域也不断扩大。

当前世界上的多肽类药物已广泛涉足疫苗、抗肿瘤药物、心脑血管药物、抗病毒药物，同时多肽类药物还有更广泛的治疗领域，例如抗菌性活性肽、诊断试剂盒、血液病、内分泌等疾病。

来自全世界肽治疗基金会的2010年报显示，从2006年-2010年，在处方药的销售中，神经系统、心血管和抗肿瘤三大类药物处于前三名；同时在抗肿瘤类药物中，蛋白和多肽类药物排名第一。

当前全球获批的多肽类药物已经高达50个之多，同时处在临床研究中的大约140个，涵盖了激素、神经、细胞生长和生殖等的各个领域，包括了营养性、调节性、抗病毒等多种生理功能。2010年，多肽类药物的全球市场销售额约为13,000,000,000美元，年复合增长率达到了7.5%至10%，超过了全球医药市场的平均增长速度，并且出现了全球销售额超过10亿美元的重磅炸弹级药品。

表1-1 全球年销售收入超过10 亿美元的多肽类药物

图1-2 处于临床研究的多肽类药物数

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