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摘 要

临床医学研究发现：藏红花提取物及其提纯组分藏红花素、藏红花苦素、藏红花酸等在免疫调节、抗肿瘤以及抗抑郁等方面都具有良好作用，并且在抗肿瘤作用上其毒副作用明显低于其它常用抗肿瘤药物。由于藏红花种植困难，产量极低，导致其资源缺乏。然而，随着植物细胞工程的发展，很多植物及其代谢产物的工业化生产迎来了新的转机，同时也成为了解决藏红花资源短缺问题的新的途径。

本实验以藏红花悬浮培养细胞生产的色素为实验材料，通过对HO·、DPPH·、ABTS ·的清除能力和总还原力的测定来研究实验材料的抗氧化活性，实验结果发现：自由基的清除能力随着加入样品质量浓度的变大也随之增强。藏红花悬浮培养细胞产色素类物质清除HO·的IC₅₀ 值约为柱头水提色素的5倍、抗坏血酸的9.2倍。藏红花悬浮培养细胞产色素类物质清除DPPH·的IC₅₀ 值约为柱头水提色素的56.6 倍。藏红花悬浮培养细胞产色素类物质清除ABTS ·的IC₅₀ 值约为柱头水提色素的92.6 倍、抗坏血酸的7.7倍。藏红花悬浮培养细胞产色素类物质的总还原力虽然略低于抗坏血酸，但远高于柱头水提色素。上述结果表明：藏红花离体培养产生的色素类物质有很高的抗氧化能力，可以将其作为一种天然抗氧化剂进行开发和利用。

关键词：藏红花 悬浮培养 抗氧化 自由基 柱头色素 细胞合成色素

Abstract

Clinical medical research finds that: saffron extract and its constituents, such as crocin,picrocrocin and crocetin has distinct efficacy in anti-tumor, immunoregulation, anti-depression and so on. And its toxic and side effects were significantly lower than other commonly used antitumor drugs in the anti-tumor effect. Because of saffron cultivation difficult, yield is very low, due to the lack of resources.Since the development of plant cell engineering, it had provided opportunities for various plant and its secondary metabolites productions in large scale. Therefore, this technique offered an effective way for resolving the promblem of saffron shortage.

Using saffron suspension culture cells as experimental materials, study on HO·, DPPH·, ABTS · clear methods research saffron suspension culture cell antioxidant, free radical scavenging ability in turn increase with the accession to the quality of the sample concentration increase, showing a good dose-response relationship. The IC₅₀ value of the saffron pigment substances to scavenging HO·approximately 5times of stigma ethanol extract pigment, 9.2 times of ascorbic acid.The IC₅₀ value of the substances to scavenging DPPH· approximately 55.6times of stigma ethanol extract pigment.The IC₅₀ value of the saffron pigment substances to scavenging ABTS · approximately 92.6 times of stigma ethanol extract pigment, 7.7times of ascorbic acid. Saffron suspension culture cells to produce pigment substances of total reducing power although slightly lower than that of ascorbic acid, but much higher than stigma aqueous extract of pigment. In the three kinds of antioxidant system, Saffron pigment substances showed high antioxidant activity, even stronger than ascorbic acid and stigma, saffron corms callus is suitable for the development of natural antioxidants.

KEYWORDS: Saffron ; Cell suspension culture; Antioxidant; Radicals;Stigma pigment;Pigment produced by cells

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 藏红花研究概况 1

1.1.1 藏红花的生物学特征 1

1.1.2 藏红花主要化学成分 1

1.1.3 藏红花的药理研究 1

1.1.4 悬浮培养藏红花细胞 1

1.2 藏红花的抗氧化活性研究情况 2

1.2.1 自由基的简介 2

1.2.2 自由基对人体健康的影响 2

1.2.3 自由基的清除 2

1.2.4 藏红花的抗氧化活性 3

1.2.5 藏红花的抗肿瘤作用 3

1.3 本课题的研究意义及内容 4

第二章 实验材料和方法 5

2.1实验材料 5

2.1.1 材料 5

2.1.2 实验试剂 5

表2-1 实验试剂 5

2.1.3 实验仪器 5

2.2 实验方法 6

2.2.1 藏红花色素的提取 6

2.2.2 藏红花色素的测定 6

2.2.3 藏红花悬浮培养细胞产生的色素抗氧化活性研究方法 6

第三章 结果与讨论 9

3.1 藏红花色素类物质的HO·清除能力 9

3.2 藏红花色素类物质的DPPH·清除能力 10

3.3 藏红花色素类物质清除DPPH·的反应时间 11

3.4 藏红花色素类物质的ABTS ·的清除能力 13

3.5 藏红花色素类物质清除ABTS ·的反应时间 14

3.6 藏红花色素类物质总还原力的测定 16

第四章 总结与展望 18

4.1 总结 18

4.2 展望 18

参考文献 19

致 谢 22

第一章 文献综述

藏红花（Crocus sativus L.）又名西红花、番红花、撒馥兰，是鸢尾科（Iridaceae）番红花属（Crocus）球根类多年生草本植物^[1]。主要生长在地中海、欧洲和中亚地区。藏红花对于预防癌症和治疗癌症有显著的功效^[2-3]，并且藏红花在抗心血管疾病、免疫调节、对肝胆和肾脏的作用都具有良好的功效^[4-6]，引起了人们的重视。

1.1 藏红花研究概况

1.1.1 藏红花的生物学特征

多年生草本。球茎扁圆球形，直径约3厘米，叶基生，蒴果椭圆形，长约3厘米^[7]。

1.1.2 藏红花主要化学成分

藏红花起主要作用的化学成分集中在柱头，主要有藏红花酸、藏红花醛、藏红花素、藏红花苦素等^[8]。国外以藏红花素、藏红花苦素以及藏红花醛等的吸收值来评价藏红花的等级^[9-10]，见表1。

表1 藏红花品质等级标准

1.1.3 藏红花的药理研究

藏红花是一种以活血养血而闻名天下的名贵中草药。藏红花在欧洲和亚洲被用于治疗妇科类疾病，现代研究发现藏红花对于改善心血管系统、调节免疫功能、抗癌及抗肿瘤、抗氧化性等方面都有明显的功效^[11-12]。

1.1.4 悬浮培养藏红花细胞

藏红花繁殖速度慢，栽培困难，我国的藏红花资源明显短缺，不能满足市场的需求。本实验通过诱导藏红花球茎的愈伤组织细胞系，采用摇瓶法对藏红花细胞进行液体培养，并对其主要代谢产物藏红花素类物质进行抗氧化活性的方面进行研究^[13-14]。

1.2 藏红花的抗氧化活性研究情况

1.2.1 自由基的简介

自由基，其化学性质活泼，它们在生物体内掠夺其他物质的电子从而形成稳定的物质，使得细胞内包括DNA、蛋白质、脂质、糖类、有机酸等几乎所有生物分子的结构遭到破坏^[15]。

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