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摘 要

D-氨基酸在医药，科研等各领域应用前景广泛，通过一菌两酶法水解不同的取代海因可制备得各种D-氨基酸。HPLC法分析样品检测速度快，精密度高，适用性广，已经成为氨基酸众多检测方法中较为高效突出的。

本课题主要通过HPLC法检测分析酶法制备D-氨基酸过程中的氨基酸及其前体，并对色谱条件进行优化，找出较为理想的检测方案，建立了合适的HPLC分析法用以测定转化液中BH,D-Phe及HPH，D-HPG的含量，便于随时优化转化条件。

HPLC方法检测通过峰的保留值做定性分析，峰面积，峰高做定量分析。通过不断改变色谱条件，确定最佳流动相配比，pH，波长，流速，缓冲液浓度等等。利用色谱图中的保留值，峰宽判断色谱柱的分离效能，峰间距评价固定相和流动相选择是否合理等来优化实验方案，并考察HPLC法的精密度和准确度。

关键词：D-氨基酸 HPLC检测分析 海因

HPLC to detect amino acids and their precursors in the anzymatic preparation of D-amino acids

Abstract

D-amino acids are widely used in various fields of medicine,scientific research,etc.A varity of D-amino acids can be prepared by hydrolyzing different substituted heils through a two-enzyme method.HPLC has the advantage of high separation efficiency,fast analysis speed,high sensitivity and wide application range.It has become a highly effective method for many amino acid detection methods.

In this paper,the amino acid and their precursors in the preparation of D-amino acids were analyzed by HPLC,and the chromatograpHic conditions were optimized to find the ideal detection scheme.

The HPLC method is based on the retention value of the peak to do qualitive analysis,peak area,peak height to do quantitive analysis.In the experiment,the optimal flow ratio,pH,wavelength,flow rate and buffer concentration were determined by changing the chromatograpHic conditions.According to the retention value and peak width in the chromatogram,the seperation efficiency of the column can be judged.The peak spacing can evaluate whether the stationary pHase and the mobile pHase are reasonable to optimize the experimental scheme.In addition,the experiment will also examine the precision and accurancy of HPLC. 

Key Words: D-amino acid; HPLC detection and analysis; Glycolylurea

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 D-氨基酸及其前体的简介 1

1.1.1 D-氨基酸的简介 1

1.2 D型氨基酸的应用 1

1.3 D-氨基酸的制备 2

1.4 D-氨基酸的前景与发展 3

1.5 D-氨基酸的检测方法 3

1.6 D-氨基酸及其前体的HPLC分析 4

1.6.1 HPLC技术的简介 4

1.6.2 HPLC的原理 4

1.6.3 建立HPLC分析法的步骤 5

1.7 HPLC法检测分析酶法制备的D-氨基酸及其前体的意义 5

第二章 实验方法 7

2.1 材料部分 7

2.1.1 实验主要仪器 7

2.2 实验方法 7

2.2.1 实验思路 7

2.2.2 色谱条件 8

第三章 实验内容与讨论 9

3.1色谱条件对比以及样品的测定 9

3.1.1 两种色谱条件的对比 9

3.1.2 样品的测定 13

3.2 色谱条件的优化 15

3.2.1 柱温的选择 15

3.2.2 检测波长的选择 16

3.2.3 流速的选择 19

3.2.4 流动相配比的选择 22

3.2.5最适pH的选择 26

3.2.6 无机盐浓度的选择 29

3.3 方法的验证 31

3.3.1 精密度考察 31

第四章 实验总结与展望 37

4.1 流动相的选择 37

4.1.1 系统适用性色谱条件 37

4.1.2 柱温的确定 37

4.1.3 检测波长的确定 37

4.1.4 流速的确定 37

4.1.5 流动相配比的确定 37

4.1.6 流动相pH的确定 37

4.1.7 流动相无机盐浓度的确定 38

4.2 方法学考察 38

4.2.1 方法精密度考察 38

4.2.2 样品线性范围考察 38

4.3 展望 39

参考文献 41

致谢 43

第一章 文献综述

1.1 D-氨基酸及其前体的简介

1.1.1 D-氨基酸的简介

氨基酸依据旋光异构性的差异一般分成L型氨基酸与D型氨基酸，天然界中构成蛋白质的氨基酸除Gly以外都是L型氨基酸，D型氨基酸主要参与细菌的细胞壁组成，多存在于微生物，植物等生物体内，在室温下D-氨基酸多为白色晶体，在水溶液中有较大的溶解度，少数D-氨基酸还能溶于有机试剂如乙醇，乙醚等^[1]。

1.1.2 前体简介

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