surfactin高产菌株中乙酰乳酸合成酶的克隆表达及酶学性质研究开题报告
2020-07-02 22:59:38
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
一、乙偶姻/2,3-丁二醇(2,3-bd) 乙偶姻和2,3-丁二醇(2,3-bd)是重要的平台化合物,由于其广泛的应用[1-5],它们的衍生化合物也是有价值的化学品。
支链氨基酸(l-缬氨酸,l-亮氨酸和l-异亮氨酸)可用于膳食产品,药物,化妆品,动物饲料添加剂,或作为抗生素或除草剂的前体[6-8]。
乙酰乳酸是乙偶姻/ 2,3-bd生物合成的直接底物,是l-缬氨酸和l-亮氨酸的前体,而α-乙酰羟基丁酸是l-异亮氨酸的前体[9]。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
在本次研究中,我们使用surfactin高产菌株中的乙酰乳酸合成酶来替代文献中的地衣芽孢杆菌乙酰乳酸合酶,筛选出合适的反应条件,以期获得更加高的乙偶姻/ 2,3-丁二醇的产量。
具体步骤如下: 1. 制定乙偶姻标准曲线; 2. 对surfactin高产菌株加入iptg进行诱导表达; 3. sds-page初步检测诱导表达结果 4. 超声破碎菌体沉淀 5. bradford法测定蛋白浓度 6. 蛋白酶的分离纯化并sds-page检测结果 7. 通过测量酶活性来确定alss的最佳温度和ph。
8. 通过在不同底物浓度条件下测量酶活性来确定alss的动力学参数。
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