1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

1前言

食源性致病菌快速检测技术的发展对于我国应对和控制食源性疾病的爆发至关重要。目前在基层监管执法中应用最为广泛的食源性致病菌快速检测技术主要包括以免疫学为基础的酶联免疫吸附技术和免疫磁珠分离技术；以及以分子生物学技术为基础的 pcr技术和环介导等温扩增等技术。虽然目前已经研发出了很多针对食源性致病菌的快检技术, 这些技术与传统检验技术相比, 具有灵敏度高、特异性强等特点外, 所需的检测时间短等优点。但是，迄今为止，食源性致病菌的快检技术依然面临很难突破的技术瓶颈。这主要是因为食品中食源性致病菌的含量极低，为了获得足够量的检测靶点, 不得不对样本进行增菌处理。通常增菌时间需要 4~24 h, 此过程拖慢了整个检测的速度, 以至于在基层执法或者大型活动的食品保障工作中，很难实现短时间内对食品中食源性致病菌的检测。目前有个别文献报道，针对一些食源性革兰氏阴性致病菌, 可以实现真正意义的快速检测，即无需对样品进行增菌处理，目标菌经磁珠富集后，可以直接进行菌体pcr扩增实验以实现对致病菌进行鉴定。 这些快检技术的发明,解决了革兰氏阴性致病菌的无扩增快检技术的理论难题。然而, 这些快检技术能否研发成功的关键在于能否制备出高效、特异的分离磁珠, 这一点目前仍是技术难点, 有待突破^[1]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

1. 研究的问题：

研究报道，在利用锌指蛋白融合荧光素酶开发新的食品微生物快检方法时，融合后的荧光素酶活力比游离酶降低了10倍。通过融合方法的改进，希望能够提高荧光素酶的活力。同时，融合后的锌指蛋白，对于含有单碱基突变的pcr产物仍然具有特异性，会在检测中出现假阳性的结果，通过优化融合方案，希望解决此问题。

2.研究的途径：