电击转染CHO细胞筛选高量表达凝血因子Ⅺ克隆开题报告
2020-04-14 16:04:14
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
1.凝血因子Ⅺ的性质、作用及应用。
1.1凝血因子Ⅺ的性质
凝血因子Ⅺ(fⅪ),又称为rosenthal因子,即抗血友病球蛋白c,是一种丝氨酸蛋白酶原,由肝细胞和巨核细胞合成。在已知的至少15种凝血因子中, fⅪ在内源性凝血途径中起重要作用,在血浆中其与高分子量激肽原以非共价结合形成复合物。fⅪ分子量为160kd,由2条相同分子量(80kd)的多肽链通过二硫键连接形成二聚体, 等电点( pi) 约8.19#8212;9.11,储存稳定,具有肝素结合位点。FⅪ在血循环中以酶原形式存在,凝血过程中在磷脂表面被活化的凝血因子Ⅻ(FⅫa)、凝血酶或自身裂解所激活,生成活化的凝血因子Ⅺ(fⅪa)。fⅪa由含4个ap结构域(apple domain)的重链(45~50 kd)和含丝氨酸蛋白酶活性的轻链(35 kd)通过二硫键连接。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
拟解决的问题:
电击法转染的条件因细胞种类和电击仪而异,有必要建立适合 cho细胞的电击转染条件。
此外,对电击转染后得到的细胞株进行培养,加压筛选,以得到高量表达凝血因子Ⅺ克隆。
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