论文总字数：17623字

摘 要

本文以实验室传统培养的生长状态较好的铁皮石斛幼苗为出发植株，对其培养条件及生长状态作初步研究。再对其愈伤组织进行低能N 离子束诱变，然后进

行诱变后铁皮石斛的组织培养，分析其愈伤组织的存活率、诱变后突变长势分析

和愈伤组织芽生根的状态及生长周期等。通过实验分析得出最佳的离子诱变剂量。

并且通过实验得到生长周期短、生长品质高的铁皮石斛。实验结果表明，运用低

能N 离子束诱变能有效的诱导铁皮石斛的遗传变异，为诱变选育高品质铁皮石斛提供理论指导。

关键词：铁皮石斛 组织培养 离子束注入 诱变选育

The research and optimization of Ion beam injected for mutation breeding of high quality Dendrobium officinale Kimura et Migo

Abstract

The original plants of this study is the Dendrobium officinale Kimura et Migo, which was traditional cultured on the laboratory and grew well . Making a preliminary

Research on the culture conditions and growth state . Then used the low energy ion beam mutation on the callus and made tissue culture on mutagenesis Dendrobium officinale Kimura et Migo . Analyze the survival rate of callus, positive and negative mutation rate and callus bud rooting state and growth cycle, etc. Through the experimental analysis concluded that the best ion mutagenesis energy and mutagenesis dose. And achieve the short growth cycle, high quality Dendrobium officinale Kimura et Migo. The experimental results show that the use of low energy ion beam implantation can induce Dendrobium officinale Kimura et Migo genetic variation, and provides theoretical guidance for the Breeding of high quality Dendrobium officinale Kimura et Migo.

Key words: Dendrobium officinale Kimura et Migo; Tissue culture; Ion implantation;

Mutation breeding

目 录

摘 要……………………………………………………………………………...I

Abstract…………………………………………………………………………....II

第一章 文献综述.................................................................................................1

1.1 铁皮石斛的介绍与培养………………………………………………………..1

1.1.1 概述…………………………………………………………………….......1

1.1.2 铁皮石斛的鉴定……………………………………………………….......1

1.1.3 铁皮石斛的组织培养………………………………………………….......2

1.1.4 铁皮石斛组织培养的发展现状及前景……………………………….......3

1.2 离子束注入诱变………………………………………………………………..3

1.2.1 离子束诱变育种的方法及原理……………………………………….......3

1.2.2 离子束注入的生物效应……………………………………………….......4

1.2.3 低能离子注入诱变机理……………………………………………….......4

1.2.4 离子注入的发展现状及前景………………………………………….......5

1.3 本文的研究内容及研究意义……………………………………………..........6

第二章 实验材料与方法……………………………………………………...7

2.1 材料……………………………………………………………………………..7

2.1.1 植物材料…………………………………………………………………...7

2.1.2 主要仪器…………………………………………………………………...7

2.1.3 主要试剂…………………………………………………………………...7

2.1.4 培养基………………………………………………………………...........8

2.2 实验方法………………………………………………………………………..9

2.2.1 培养基的制备……………………………………………………………...9

2.2.2 分析方法…………………………………………………………………...9

2.2.3 低能氮离子注入诱变……………………………………………………...9

2.2.4 存活率计算与突变长势………………………………………………….10

2.2.5 铁皮石斛愈伤组织培养条件的优化……………………………….........10

2.2.6 铁皮石斛叶中多糖的测定………….……………………………………11

第三章 实验结果及讨论…………………………………………………….13

3.1 愈伤组织的选择及培养条件的分析…………………………………………13

3.1.1 不同激素配比及外植体对愈伤组织诱导的影响……………………….13

3.2 氮离子注入诱变条件的优化…………………………………………………16

3.2.1 注入剂量的选择.........................................................................................16

3.3 铁皮石斛叶中多糖含量测定分析……………………………………………18

3.3.1 蔗糖的标准曲线………………………………………………………….18

3.3.2 低能离子束处理对铁皮石斛叶中糖含量的影响……………………….18

第四章 结论与展望…………………………………………………………..20

4.1 结论……………………………………………………………………………20

4.2 展望……………………………………………………………………………20

参考文献...............................................................................................................21

1. 文献综述

1.1铁皮石斛的介绍及培养

• • 1. 概述

铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）又名：黑节草、云南铁皮。属于微子目，是一种兰科附生草本植物。茎直立,长10-36cm，粗3-5mm，圆柱形，其花瓣为黄绿色，花期4~6月。主要分布于我国的安徽、浙江、福建等地^[1]。是一种名贵的中草药，属于补益药，补阴药：益胃生津，滋阴清热。铁皮石斛的种子非常小、且没有胚乳，在自然条件下，铁皮石斛只有与某些真菌共生才能萌发发芽，若用传统的分株、扦插等繁殖方式，繁殖率非常低，且很难用野生苗栽培获得。近年来，过度的人为采挖以及生态环境遭到严重破坏，铁皮石斛的野生资源已濒临灭绝，所以被列为国家重点保护的药用植物之一。为满足国内外经济发展需要和临床医学的要求，国内外科研工作者不断地对铁皮石斛进行组织培养的研究并致力于研究铁皮石斛的人工栽培选育技术，取得了较大成果^[2-3]。

• • 1. 铁皮石斛的鉴定

为选择出品质较好的铁皮石斛，国内外许多科学家研究出了多种用于鉴定铁皮石斛的方法。主要分为传统鉴定方法和分子水平鉴定方法：

1 传统的鉴定方法^[4]

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