论文总字数：14702字

摘 要

癌细胞的扩散这一问题一直是困扰我们人类生命的健康安全的一大隐患，那么如何能有效的抑制癌细胞的迁移与扩散便成为了研究者很关注的一个课题。冬凌草甲素的主要加工的流程包括以下几点：醇提、萃取、层析、结晶，并且还能抑制和灭杀多种癌细胞。此外在临床实验的应用中，抗癌，抗菌、杀虫清热解毒等也是冬凌草甲素能起到的功效。本实验中，我们通过细胞划痕实验，MTT实验，Western Blot实验等来检测冬凌草甲素是否能抑制TGF-β诱导的人骨肉瘤细胞MG-63的侵袭与迁移。但是非常遗憾的是，就目前而言，与冬凌草甲素有关的药物较为稀少，因此想要在临床上得到大规模的应用还有很多的研究工作需要开展。造成这种局面的原因主要有两点，其一是因为：目前为止科学家还没有完全了解与掌控冬凌草甲素的潜在抗肿瘤机制；另一方面的原因是：冬凌草甲素类的药物的水溶性很差，所以在使用这类药物时，使用者的耐受性会很糟糕。但同时，也正是由于它杰出的抗肿瘤活性，才让它具有了更大的研究空间与研究价值。研究者可以从药理和药剂两方面去研究冬凌草甲素。本课题的目的是研究冬凌草甲素抑制TGF-β诱导的人骨肉瘤细胞MG-63的迁移与侵袭，可以从中发现其发挥药效的部分，让其更好地为抗肿瘤作出贡献。

关键词：TGF-β EMT 冬凌草甲素 骨肉瘤

Effect of oridonin on the migration and invasion of human osteosarcoma cell line MG-63 induced by TGF-β

Abstract

The spread of cancer cells has been a major risk of human health and safety hazards, how to effectively inhibit the migration and spread of cancer cells is a topic of concern to the researchers. Oridonin mainly by alcohol extraction, extraction, chromatography, crystallization and other processes to complete a variety of cancer cells have a strong inhibitory effect. Mainly used for anti-cancer, anti-bacterial, anti-tumor, insecticidal detoxification, anti-inflammatory pain, stomach blood. The detection of oridonin TGF-β can inhibit the proliferation of cancer cells by means of cell scratch test and MTT assay. However, the application of oridonin is now the application of drugs rarely, clinically and not to large-scale application. On the one hand because of its mechanism of action, especially its anti-cancer mechanism of action has not been completely clear; the other reason is the oryzanol is less water-soluble, the use of the body is not well tolerated. It is also because of its conditions, it has a greater research space, from the pharmacological and pharmaceutical aspects to study.

Key Words: TGF-β EMT Oridonin Osteosarcoma

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1冬凌草甲素 1

1.2骨肉瘤 1

1.3 细胞的侵袭与迁移 2

第二章 材料和方法 5

2.1 试剂 5

2.1.1.细胞株 5

2.1.2.药 物 5

2.1.3细胞培养试剂 5

2.1.4 MTT实验试剂 5

2.1.5 细胞划痕实验材料 5

2.1.6抗 体 5

2.1.7 Western blot相关试剂 5

2.2仪器 6

2.3实验方法 7

2.3.1体外细胞培养 7

2.3.2四甲基偶氮唑盐（MTT）法 7

2.3.3细胞划痕实验方法 8

2.3.4 Western blot 实验原理及方法 9

第三章 结果与讨论 11

3.1 MTT实验结果 11

3.2细胞划痕实验结果 11

3.3 Western blot实验结果 12

第四章 结论 13

参考文献 14

致 谢 17

第一章 文献综述

1.1冬凌草甲素

冬凌草甲素通过醇提、萃取、层析、结晶等步骤萃取，对癌细胞有抑制和灭杀的作用。冬凌草甲素的药用价值很高，能够抗癌，抗菌、消炎止痛等等。冬凌草是一种香茶类的植物，在我国的领土内有着非常广泛的分布，传统的中医普遍认为，取冬凌草干燥的地上部位作为药引，可以治疗多种疾病，并且疗效显著。同时在体内外，冬凌草甲素的抗癌作用非常突出。冬凌草甲素有着很广泛的来源，因为它可以从很多植物之中提取出来。与此同时，冬凌草甲素可发挥催化剂的作用，对放疗，化疗等的治疗效果有着很明显的改善作用。虽然到目前为止大量的科研工作者对于冬凌草甲素进行了海量的研究与实验，但是我们依旧没有彻底搞清楚冬凌草甲素的抗癌作用机制的核心部分，所以这些研究并不能有效的应用到临床治疗中去。目前，人类用于临床上的有关冬凌草甲素的制剂多半是口服或者是局部制剂，这类制剂的质量控制相当的繁琐，想要达到有效的血药浓度非常困难，因此这类药物就很难发挥出应有的药效了。目前冬凌草甲素相关制剂的脂溶性，刺激性很大，病人在治疗中常常会有很多不适，还可能存在引发脉管炎的危险，因此，目前就很有研发新类型冬凌草甲素制剂的必要。

1.2骨肉瘤

骨肉瘤是最常见的高级原发性骨肿瘤，且是儿童和青少年时期发生的最常见的原发性恶性骨肿瘤。治疗骨肉瘤的方法主要是新型辅助化疗，手术切除术和术后再次化疗。目前临床使用的几种抗癌药物，如甲氨蝶呤，多柔比星，顺铂，依托泊苷，环磷酰胺通常单独使用或组合使用。尽管近年来治疗方案有所进展，但骨肉瘤的复发以及化疗耐药性一直是我们面临的主要挑战。据统计，经过治疗，局部患有骨肉瘤的患者的5年生存率已提高到60％，但在过去三十年中似乎已经达到瓶颈，并没有再有所突破。 因此，开发更有效的针对骨肉瘤的疗法迫在眉睫。

肿瘤一般都存在于人骨的骨端，骨肉瘤从何而来？人类如何战胜骨肉瘤呢？骨肉瘤是主要来源于原始祖细胞的，这种细胞的潜伏性非常大，并且善于分化。在医学上，科研工作者根据骨肉瘤细胞的特性，将他们进行了系统的分类，大致的归结为下面这几种不同的类型：

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