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摘 要

当前社会生物技术不断进步，人们对酶的使用也越来越频繁，这就要求我们要不断开发拓展新的酶的应用手段；定向固定化 技术，酶和载体之间进行有序的连接，这种技术，不会遮挡酶的活性位点，能够保持比较高的酶活比活性，在未来对社会的发展具有很大的推动作用。本文实验使用的是孔径相对较大的树脂，采取两种固定化的方法：树脂先活化再定向固定和树脂直接定向固定，将两种固定化酶和游离酶的性能进行比较，选择活性高的酶，实验数据显示：树脂先活化再固定的酶可多次重复利用，活性也保持相对较好。

通过对固定化核酸酶P₁性质研究表明：游离酶和固定化酶的最适pH均为5.0 ,而最适温度 HA-GA-ConA-Egt;HA-GA-Egt;游离酶；动力学方面，HA-GA-E的米氏常数（K_m）和最大反应速率（V_max）分别为0.77 mg·mL^-1和0.34mg.min^-1·mL^-1，HA-GA-ConA-E的米氏常数（K_m）和最大反应速率（V_max）分别为0.72mg·mL^-1和0.38mg.min^-1·mL^-1,游离酶的米氏常数（K_m）和最大反应速率（V_max）分别为0.73 mg·mL^-1和0.27mg.min^-1·mL^-1。

关键词：核酸酶P₁ 定向固定化酶 大孔吸附树脂 戊二醛 ConA

Study on the Performance of Immobilized Nuclease P₁

ABSTRACT

The current social biotechnology advances, people use the enzyme more and more frequently, which requires us to continue to develop new ways to expand the application of enzymes; directional immobilization technology, enzyme and carrier between the orderly connection Technology, will not block the enzyme activity sites, to maintain a relatively high activity than the activity in the future development of society has a great role in promoting. In this paper, the use of relatively large pore size of the resin, to take two immobilization methods: resin first re-directional fixed and resin direct orientation fixed, the two immobilized enzyme and free enzyme performance comparison, select the high activity Enzyme, experimental data show that: resin first activated and then re-enzyme can be repeated use, the activity is also relatively good.

The optimum pH of the immobilized enzyme and free enzyme was 5.0 , and the optimum temperature was HA-GA-ConA-Egt; HA-GA-Egt; free enzyme. The kinetic aspects, The Michaelis-Menten constant (K_m) and the maximum reaction rate (V_max) of HA-GA-E were 0.77 mg • mL^-1 and 0.34 mg.min^-1 • mL^-1 respectively.The Michaelis-Menten constant of HA-GA-ConA-E (K_m) and maximum reaction rate (V_max) of the free enzyme were 0.72 mg • mL^-1 and 0.38 mg.min^-1 • mL^-1, respectively, and the maximum reaction rate (K_m) and the maximum reaction rate (V_max) • mL^-1 and 0.27 mg.min^-1 • mL^-1.

Key words: Nuclease P₁；Directional immobilized enzyme；Macroporous adsorption resin；Glutaraldehyde；ConA

目录

摘 要

ABSTRACT 2

第一章 文献综述 5

1.1 核苷酸的用途 5

1.2核苷酸的生产方法 5

1.3核酸酶P₁的研究进展 5

1.3.1 核酸酶P₁的理化性质 6

1.3.2 核酸酶P₁的结构 6

1.3.3 核酸酶P₁的作用机制 7

1.4核酸酶P₁的固定化技术 7

1.4.1 传统的核酸酶P₁的固定化方法 8

1.4.2 核酸酶P₁的定向固定化 8

1.5本文的探讨方式和选题内容 9

1.5.1 论文选题的探讨方式 9

1.5.2 本课题的选题内容 9

第二章 实验部分 10

2.1 实验材料 10

2.1.1 载体材料 10

2.1.2 实验所用药品 10

2.2 实验仪器 11

2.3 实验方法及内容 11

2.3.1 各种溶液的配制 11

2.3.2 树脂的活化 12

2.3.3核酸酶P₁的纯化 12

2.3.4酶的固定化 12

2.3.5 酶学性质分析 13

2.3.6固定化酶的重复利用 14

第三章 结果与讨论 15

3.1 核酸酶P₁的纯化 15

3.1.1蛋白质标准曲线的绘制 15

3.2 ConA浓度的影响 15

3.2.1 浓度对不同载体ConA结合量的影响 15

3.2.2 固定化酶酶载量受浓度的影响 16

3.2.3 ConA浓度和固定化酶活性之间关系 16

3.3表征分析 17

3.3.1 FT-IR 17

3.3.2 TGA 18

3.4 固定化酶酶催化性能分析 20

3.4.1固定化酶酶酶活分析 20

3.4.2固定化酶最适T分析 20

3.4.3固定化酶最适pH分析 21

3.4.4 固定化酶动力学参数分析 22

3.4.5 固定化酶重复使用性分析分析 23

第四章 结论和展望 25

4.1 结论 25

4.2 展望 25

参考文献 27

第一章 文献综述

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