论文总字数：24105字

摘 要

1-3丙二醇是一种常用的化工原料，可用于制造塑料，乳化剂等多种化工产品，同时也在实验研究领域有多方面应用。目前，1-3丙二醇主要是通过化工的方式生产，虽然在应用上已经趋于成熟，但是其污染大，产量低的问题都不符合现在工厂生产的理念。相比之下，肺炎克雷伯氏菌具有清晰的遗传背景，成熟的基因表达体系。但是在改造肺炎克雷伯氏菌的调控代谢过程中，由于碳代谢途径倾斜，造成了乙酸溢流的现象，阻碍了基因改造的进程，针对这个问题。查阅大量文献及实验数据，发现不同来源的乙酰辅酶A合成酶对乙酸溢流现象有很好的乙酸吸收效果，同时不会影响1-3丙二醇的产量。基于这个发现，我们在肺炎克雷伯氏菌体内成功构建了乙酰辅酶A合成通路。并且进一步探究了不同来源乙酰辅酶A合成酶对于乙酸溢流现象的影响及1-3丙二醇产量的影响。

关键词：乙酸 肺炎克雷伯氏菌 乙酰辅酶A合成酶 基因工程

Regulation of pneumonia by acetyl CoA synthetase gene from different sources Acetic acid overflow of Klebsiella

ABSTRACT

1-3-propanediol is a kind of common chemical raw material, which can be used to manufacture many kinds of chemical products, such as plastics, emulsifiers and so on. At present, 1-3 propanediol is mainly produced by chemical industry. Although it has become mature in application, the problems of large pollution and low output are not in line with the concept of factory production. In contrast, Klebsiella pneumoniae has a clear genetic background and mature gene expression system. However, in the process of transformation of Klebsiella pneumoniae, due to the tilt of carbon metabolism pathway, the phenomenon of acetic acid overflow was caused, which hindered the process of gene transformation. Based on much of literature and data, it is found that acetyl CoA synthetase from different sources has a good absorption effect on acetic acid overflow, and does not affect the production of 1-3-propanediol. Based on this discovery, we successfully constructed the acetyl coenzyme a synthesis pathway in Klebsiella pneumoniae. Furthermore, the effect of acetyl coenzyme A synthetase from different sources on the overflow of acetic acid and the production of 1-3-propanediol were studied.

Key words: acetic acid klebsiella pneumoniae Acetyl coenzyme A synthetase genetic engineering

目 录

摘 要 I

ABSTRACT II

目 录 III

第一章 文献综述 6

1.1 1-3丙二醇的概述 6

1.1.1 1-3丙二醇的背景 6

1.1.2 1-3丙二醇的结构 6

1.1.3 1-3丙二醇的功能与应用 6

1.1.4 1-3丙二醇的生产 7

1.2肺炎雷克伯氏菌简介 8

1.2.1肺炎克雷伯氏菌的研究背景 8

1.2.2 肺炎克雷伯氏菌中的代谢路径 8

1.3 乙酰辅酶A合成酶对于乙酸溢流现象的概述 9

1.3.1乙酸溢流现象的概述 9

1.3.2乙酰辅酶A合成酶研究状况 10

1.3.3乙酰辅酶A合成酶的具体应用 10

第二章实验材料与方法 11

2.1 实验材料与仪器 11

2.1.1 质粒与菌种 11

2.1.2 材料与仪器 12

2.1.3 培养基 13

2.2 菌体培养 14

2.3质粒提取以及胶回收方法 15

2.3.1 提质粒方法 15

2.3.2 胶回收方法 15

2.4 克雷伯氏菌转化 16

2.5 基于自杀质粒的基因编辑方法 17

2.6构建pDK7-pc-acs_ap过表达菌株 17

2.6.1 重组质粒pDK7-pc-acs_ap的构建 18

2.6.2 重组质粒的转化 19

2.6.3 重组菌株验证 19

2.7构建pDK7-pc-acs_kp过表达菌株 19

2.7.1 重组质粒pDK7-pc-acskp的构建 19

2.7.2重组质粒转化 20

2.7.3 重组菌株验证 20

2.8 菌种的保藏 20

第三章 结果与分析 21

3.1 重组质粒pDK7-pc-acs_ap的构建结果分析 21

3.1.1 构建pDK7-pc-acs_ap重组质粒图 21

3.1.2 重组质粒pDK7-acsap的菌落PCR验证 21

3.1.3 重组质粒pDK7-acs_ap的序列测定 21

3.2 重组质粒pDK7-pc-acs_kp的构建结果分析 23

3.2.1 构建pDK7-pc-acs_kp重组质粒图 23

3.2.2 重组质粒pDK7-acs_kp的菌落PCR验证 23

3.2.3 重组质粒pDK7-acs_kp的序列测定 23

3.3不同ACS基因对肺炎克雷伯氏菌乙酸代谢的影响 24

第四章 结论与展望 28

参考文献 29

附录 32

请支付后下载全文，论文总字数：24105字