文 献 综 述

一、奥贝胆酸药品概述

奥贝胆酸是二十年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物，由美国Intercept制药公司开发^[1]。奥贝胆酸研究用于那些对旧标准治疗药物熊去氧胆酸没有充分应答或不能耐受的患者，奥贝胆酸又名6-乙基鹅去氧胆酸，是人初级胆汁酸中鹅去氧胆酸的一种新型衍生物，为法尼酯X受体（FXR）的天然配体^[2][3]，结构为:

奥贝胆酸属法尼醇 X 受体激动剂，通过活化法尼醇 X 受体，间接抑制细胞色素 7A1（CYP7A1）的基因表达，由于 CYP7A1 是胆酸生物合成的限速酶，因此奥贝胆酸可以抑制胆酸合成，用于治疗原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病^[3]。一项关于非酒精性脂肪性肝炎治疗的临床试验因其治疗原发性胆汁性肝硬化的实验性药物奥贝胆酸 ( OCA) 疗效优于预期而被提前终止，这项被称为POISE的最新试验表明，OCA 治疗原发性胆汁性肝硬化可带来临床意义上的改善^[1]。

二、药物中间体分析方法

药物中间体实际上是一些用于药品合成工艺过程中的一些化工原料或化工产品。这种化工产品，不需要药品的生产许可证，在普通的化工厂即可生产，只要达到一些的级别，即可用于药品的合成。医药中间体是生产医药产品的过程中，使用的原料、材料、辅料等中间产品，实际上是一些用于药品合成工艺过程中的一些化工原料或化工产品。 医药中间体的质量，很大程度上决定了最终产品的质量。奥贝胆酸紫外吸收很弱，末端吸收干扰大，奥贝胆酸中间体的分析一般用高效液相色谱-蒸发光散射检测器。^[4][5][6]

2.1高效液相色谱法原理

高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来，从而实现对样品的分析。^[4][7]

2.2正相高效液相色谱法^[8][9][10]

以亲水性的填料作为固定相（如在硅胶上键合羟基、氨基或氰基的极性固定相），以疏水性溶剂或混合物作为流动相。正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)，以及其他具有极性官能团，如胺基团(NH2,APS)和氰基团 (CN,CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如:正乙烷(Hexane)，氯仿(Chloroform)，二氯甲烷(Methylene Chloride)等。高效液相色谱是一种色谱法, 主要用于多成份混合物系统的分离, 这种方法使以往的柱色谱达到了高速化。分离性能高，应用性广，较其他一些色谱法具有很多优越性，具有快速方便、灵敏度高、选择性好，可同时分析多种离子化合物。

2.3反相高效液相色谱法^[11][12]

反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18(ODS),C8(MOS),C4(B),C6H5(Phenyl)等。

根据疏溶剂理论,当溶质分子进入极性流动相后,即占据流动相中相应的空间,而排挤一部分溶剂分子。当溶质分子被流动相推动与固定相接触时,溶质分子的非极性部分或 非极性因子会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开,而直接与非极性固定相上的烷基官能团相结合( 吸附 )形成缔合络合物,构成单分子吸附层。这种疏溶剂的吸附作用是可逆的,当流动相极性减少时,这种疏溶剂斥力卜降,会发生解缔,并将溶质分子解放而被洗脱下来。

反相高效液相色谱法几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离。 适于分离非极性,极性或离子型化合物,大部分的分析任务皆由反相色谱法完成；具有柱效高，使用寿命长，重现性好，几乎对各种类型的有机化合物都具有良好的选择性，用可用于梯度洗脱操作；应用广泛，技术方面也比较成熟，可以与大多数检测器相匹配。

2.4蒸发光散射检测器

高效液相色谱检测器中除了最常用的紫外检测器之外，还有二极管阵列检测器,荧光检测器,示差折光检测器,蒸发光散射检测器,化学荧光检测器,质谱检测器,电化学检测,曼光谱检测器,核磁共振检测器等。蒸发光散射检测器是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。现在ELSD越来越多的作为通用型检测器用于高效液相色谱、超临界色谱(SFC)和逆流色谱中。ELSD最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物，如:碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂、药物，并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物。ELSD的通用检测方法不同于紫外和荧光检测器，ELSD的响应不依赖于样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，不受其官能团的影响。ELSD的响应值与样品的质量成正比，因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。^[13][14][15]

三、前景与总结

HPLC已成为天然药物有效成分分离、分析最重要的方法之一,但许多成分没有紫外吸收或为紫外末端吸收,有时虽可用低波长紫外检测器,但低波长紫外检测有下列缺点:梯度洗脱时出现基线漂移,溶剂峰干扰。HPLC-ELSD在天然药物分析中的应用日益增多,国内外均有研究报道,本文对近十年来的应用进展作一概述。HPLC-ELSD法可用于对照品的标定。目前用HPLC法测定对照品的含量,多用UV检出后采用归一化法。迄今未见有ELSD应用于体内药物分析及药动学研究的报道,这可能是受其灵敏度的影响。综观目前的文献报道,ELSD的灵敏度一般为10^-8g～10^-9g。这对于体内药物分析的要求仍有一定距离。

参考文献

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[2]费菲. 谢雯:非酒精性脂肪性肝病诊疗最新进展[J]. 中国医药科学. 2015(10)

[3]刘松涛，廖慧钰. 奥贝胆酸的临床研究进展[J]. 北京医学. 2015(12)

[4]于世林. 高效液相色谱方法及应用[J]. 核化学与放射化学. 2005(06)

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[6]朱业晋, 张旻杰. HPLC-ELSD在药物分析中的应用进展[J]. 赣南师范学院学报. 2003(06)

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[8]傅若农. 色谱分析概论[J]. 分析化学. 2008(10)

[9]冯景春，王芹，冯开. 高效液相色谱法的应用与发展前景[J].广东化工. 2014(12)

[10]张顺堂. 高效液相色谱法的应用[J]. 发酵科技通讯. 2006(04)

[11]刘桂洋，毛香菊，陈晋阳. 反相高效液相色谱的基本原理及其应用[J]. 宁波化工. 2008 (03)

[12]王昕. 高效液相色谱研究进展[J]. 光明中医. 2011(01)

[13]张悦晗，甄汉深，成莉. 蒸发光散射检测器(ELSD)应用概况[J]. 中华中医药学刊.

2007 (04)

[14]林慧,颜春荣,徐春祥,蔡晶,王多娇. HPLC-ELSD法同时测定食品中的10种糖和糖醇[J]. 食品科学. 2013(12)

[15] 赵灵芝，朱丹妮，严永清. HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量[J]. 药物分析杂志. 1999(06)