登录

  • 登录
  • 忘记密码?点击找回

注册

  • 获取手机验证码 60
  • 注册

找回密码

  • 获取手机验证码60
  • 找回
毕业论文网 > 文献综述 > 化学化工与生命科学类 > 食品科学与工程 > 正文

重组大肠杆菌异源表达β淀粉酶的发酵优化与酶学性质研究文献综述

 2020-05-23 16:23:48  

1.1 研究背景

生物体由细胞构成,每个细胞由于酶的存在才表现出种种生命活动,体内的新陈代谢才能进行。生物体内含有数千种酶,它们支配着生物的新陈代谢、营养和能量转换等许多催化过程,与生命过程关系密切的反应大多是酶催化反应。酶的这些性质使细胞内错综复杂的物质代谢过程能有条不紊地进行,使物质代谢与正常的生理机能互相适应。若因遗传缺陷造成某个酶缺损,或其它原因造成酶的活性减弱,均可导致该酶催化的反应异常,使物质代谢紊乱,甚至发生疾病。

β-淀粉酶(β-amylase,EC3.2.1.2)又称淀粉β-1,4麦芽糖苷酶[1],糖原淀粉酶。其系统命名为α-1,4-葡聚糖-4-麦芽糖水解酶(α-1,4-D-glucan maltohydrolase)。它是一种外切糖化酶,作用于淀粉时从非还原性末端依次切开相隔的α-1,4键,发生沃尔登转位反应(Walden inversion)产物由α-型变为β-型麦芽糖,故命名为β-淀粉酶[2-5]。其广泛存在于大麦、小麦、甘薯、大豆等高等植物[6-8]以及芽孢杆菌属微生物中,是啤酒酿造、饴糖(麦芽糖浆)制造的主要糖化剂。

作为一种糖化剂,β-淀粉酶在食品工业中主要用于制造麦芽糖浆、啤酒、面包、酱油等。在制醋工业中,常用β-淀粉酶代替部分麸曲节省成本,在白酒和其他工业中也可以用其作糖化剂。在医药行业上,β-淀粉酶的一个重要用途是制造麦芽糖,医学上常用该酶和α-淀粉酶一道作为消化剂使用[9]

1.2研究现状及分析

不断对β-淀粉酶活性影响因素探究,正是因为其在工业生产中有着很大用途。但若干种细菌所产生的β-淀粉酶由于其不耐热而不能适应工业生产过程中的高温环境,这反应出不同菌株培养出的β-淀粉酶表现出不同优劣的酶学性质,因此,筛选出高产、活力较高的β-淀粉酶的菌株成为目前的研究方向。庆幸的是,王铮等人发现,高温放线菌产生的β-淀粉酶具有耐热性[10],基于此,其采用高温放线菌V4菌株,在大肠杆菌中克隆表达β-淀粉酶基因[11]。马晓梅、赵辉二人筛选出解淀粉芽孢杆菌,命名为MSP13[12],随后对其产酶条件进行优化,确定最佳产酶条件,优化后的菌株MSP13生产β-淀粉酶的酶活力提高了31.654%。

以上等人研究说明,不同来源的β-淀粉酶性质表现出显著差异。一般来讲,植物来源的β-淀粉酶的最适温度为40℃~60℃,最适酸度偏酸性;即使是来源同一植物种,其表现出的酶活力也会大不相同。江均平等研究大豆核心种质β-淀粉酶的酶学性质,发现对来源于不同纬度大豆的酶活力进行分析比较,来自北纬30#176;~ 32#176;、35#176;~ 36#176;及41 ~ 42#176;的大豆材料含有较高的酶活性[13], 而北纬37#176;~ 38#176;的酶活力较低。来源不同的β-淀粉酶热稳定性也有较大差异,大豆β-淀粉酶最适作用温度为60℃左右,大麦β-淀粉酶最适作用温度为50~55℃,而细菌β-淀粉酶最适作用温度一般低于50℃[14]

与植物β-淀粉酶相比,微生物来源的β-淀粉酶具有便于大规模工业化生产的优点,但热稳定性大都较差,最适酸度一般为中性偏弱碱性,当然也有例外,嗜热性硫化芽胞杆菌属[15],其作用底物的最适温度高达75℃,最适pH为5.5。

黄纯建、米运宏二人研究使用微生物发酵生产β-淀粉酶,结果[16]表明,微生物β-淀粉酶的稳定性、耐高温等指标均超过植物β-淀粉酶,纯度基本上达到工业生产的要求,不过,微生物发酵法得到的β-淀粉酶酶活力相对较低,成本也偏高。

筛选出培养β-淀粉酶的优质菌株后,即可进行培养发酵,提取粗酶液。据报道,一定量的还原剂可提高酶的提取率,这是因为β-淀粉酶的活性中心含有巯基(-SH),易与蛋白质形成二硫键而被屏蔽,故一些氧化剂(如Fe3 )、重金属离子(如Pb2 、Ag 、Zn2 、Cu2 )以及巯基试剂均可使其失活,为此,提取时常加入EDTA、NaHSO3、Na2SO3、巯基乙醇等以防重金属和氧化剂的干扰。同时还原性的谷胱甘肽、半胱氨酸对其具有保护作用。另外,表面活性剂有利于酶蛋白与原料分散,如向嗜热梭状硫细菌(Clostridium thermosulfurogenes)的培养基中添加少量的表面活性剂(TritonX-100、CHAPS、Tween-80、sodium taurocholate)可显著地促进β-淀粉酶的分泌[17]

剩余内容已隐藏,您需要先支付 5元 才能查看该篇文章全部内容!立即支付

微信号:bysjorg

Copyright © 2010-2022 毕业论文网 站点地图