1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

1、老黄酶的催化机理 老黄酶催化活性烯烃需要nad(p)h的参与（图2），一共分为两步，即还原半反应（氢离子从nad(p)h转移到fmn）和氧化半反应（氢离子从fmn转移到活性烯烃上）。

图2：老黄酶催化机理 图3：以环己烯酮为底物的oye1反应模型 同时，对老黄酶oye1进行的氘标记法研究也表明了老黄酶的反应过程是一个反式加氢的不对称催化，黄素辅酶（fmnh2）将氢离子从一面提供给活性烯烃，同时在对立面，另一个氢离子由侧链tyr196提供（图3）。

在该反应过程中，两个重要的氢键则在两条侧链asn194、his191与羰基中形成。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

1. 本课题的研究内容 老黄酶的酶学性质研究，主要包括最适温度，最适ph，温度和ph稳定性，金属离子和有机溶剂耐受性，底物谱，米氏常数以及手性研究，并学会使用气相和液相分析的方法对底物和产物进行分析检测。

2. 研究方法 2.1关键技术 ① 老黄酶的纯化技术 ② 酶活测定技术 ③ 底物的检测方法的建立 ④ 基因的克隆与表达技术 3.可行性分析： ① 大肠杆菌的遗传背景清晰，具有方便实用的商业化载体工具。

实验方法都是基本的分子生物学，微生物学实验技术。