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HPLC分离7种糖类物质的方法学研究文献综述

 2020-04-13 14:56:21  

文 献 综 述

1 糖类物质的简介

糖类,在生物化学等领域又被广泛称为碳水化合物, 是由碳、氢、氧三种元素组成的一大类有机化合物, 也是脂肪、蛋白质代谢的必须物质,在生物过程中起着非常重要的作用,是除蛋白和核酸之外的又一类重要的生物大分子[1]。在生物学上糖类主要起着生物体主要结构组成成分、主要能源物质、细胞识别信息分子、体内转变为其他物质等作用。糖类种类较多,根据其组成可分为单糖、低聚糖和多糖三大类;根据其功能基团不同可分为酮糖、醛糖、糖醇和糖醛酸四大类;根据其理化性质不同可分为可溶性糖和不可溶性糖,还原糖和非还原糖等[1]

2 糖的衍生方法

衍生化方法可以使糖类研究样品转变为具有光学活性的物质,增强检测信号,提高检测灵敏度,甚至能使原本难以分离的成份用简单的为人熟识的分离模式分离开来。常用的衍生化方法有紫外衍生化法、荧光衍生化法等。

2.1紫外衍生化法

大部分糖类没有紫外吸收,我们无法直接使用紫外检测,必须通过衍生的方法,使其变成具有紫外吸收的物质对其进行分析,常用的紫外衍生剂有1-苯-3-甲基-5-毗哇琳酮(PMP),3-氨基-9-乙基咔唑,对氨基苯磺酸等。

2.1.1与PMP反应

原理:该法常用衍生化试剂为1-苯-3-甲基-5-毗哇琳酮(PMP),在微酸性条件下,其与还原糖进行缩合反应,生成双PMP衍生物[2],利用它具有紫外吸收的性质在波长为245nm处进行检测。应用PMP作为衍生化试剂,可以进行单糖的组成分析及寡糖链的分离,纯化。该方法达到了衍生化反应定量进行的条件,其突出优点表现为分析稳定、没有副产物或立体异构体产生,紫外吸收强(λmax= 245 nm,ε= 30000L /mol#8226;cm)。糖链经PMP衍生后,其疏水性提高的同时,衍生化产物带电荷,可以用多种分离模式对其进行分析[3]

2.1.2 与3-氨基-9-乙基咔唑反应

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