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摘 要

本论文以本实验室固相合成的生物活性多肽反应液1(内含磷酸盐溶液)、反应液2(内含谷胱甘肽溶液)为研究对象，分别用凝胶色谱、固相萃取对该多肽进行除盐纯化，获得较理想的除盐方法.为该生物活性多肽的分离纯化奠定基础.结果如下：

1. 使用凝胶法除盐，G-10为凝胶填料，流动相为水，分别对反应液1、2进行除盐.此方法适用于反应液1，除盐效果明显.对于反应液2不能分离主峰与盐峰。
2. 使用固相萃取法除盐，以C18为固相萃取填料，淋洗液为纯净水，洗脱液为一定比例的乙腈和纯净水混合溶液.分别对反应液1、2进行除盐，此方法适用于反应液2，能有效除盐，回收率较高.对于反应液2效果不明显，回收率低。

结论：使用凝胶法除盐时适用于反应液1，此时多肽在进样量为800μL，流速为1.5mL/min时，样品的回收率最高，达到25%；使用固相萃取法除盐时适用于反应液2，上样量为700μL，淋洗量为2500μL，洗脱液为50%的乙腈和50%的纯净水，洗脱体积为1500μL时，样品回收率最高，达到95%。

关键词: 生物活性多肽 固相合成 凝胶色谱 固相萃取

Solid phase synthesis of biologically active polypeptide of desalination

Abstract

In this paper, the solid phase synthesis laboratory bioactive peptides for the study,Respectively gel chromatography, solid phase extraction and purification of the polypeptide desalination, desalination methods get better. Lay the foundation for the separation and purification of bioactive peptides. The reaction solution 1 (containing a phosphate solution); and the reaction solution 2 (containing glutathione solution) were as follows:

1, using the gel method desalination, G-10 for gel filling, the mobile phase is water, the reaction solution were carried out 1,2 desalting. This method is applicable to a reaction solution, desalination effect. For the reaction solution 2 ineffective, salt peak inseparable.

2, desalination using solid phase extraction, solid phase extraction with C18 packing, eluent for Wahaha purified water, a certain proportion of eluent acetonitrile and purified water mixed solution Wahaha. 1 and 2, respectively, the reaction was carried out desalting. This method is suitable for the reaction solution 2, the effect is obvious. For the reaction solution 2 ineffective, low recovery.

When applicable, the reaction solution was concluded that the use of a desalting gel method, then the polypeptide in the sample volume is 800μL, the flow rate was 1.5mL / min, maximum sample recovery, reaching 25%. Desalted using solid phase extraction when the sample volume is 700μL, leaching amount 2500μL, eluent of 50% acetonitrile and 50% pure water, elution volume when 1500μL, maximum sample recovery, reaching 95% .

Key words: bioactive peptides; solid phase peptide synthesis; gel chromatography; solid phase extraction

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1．1生物活性多肽及其作用和发展 1

1.1.1肽与生物活性多肽 1

1.1.2生物活性多肽在人体中的作用 1

1.1.3生物活性多肽在食品中的作用 1

1.1.4生物活性多肽的发展前景 1

1.2生物活性多肽的凝胶脱盐系统及其原理 2

1.2.1生物活性多肽的凝胶脱盐系统 2

1.2.2凝胶层析原理 2

1.3固相萃取(SPE)脱盐系统及其原理 2

1.3.1固相萃取脱盐系统 2

1.3.2固相萃取法的原理 3

1.4 本论文的主要工作 3

第二章 实验材料与方法 4

2.1 实验材料 4

2.1.1主要仪器 4

2.1.2 主要试剂 4

2.2实验方法 4

2.2.1溶液的配置 4

2.2.3固相萃取法除盐的方法 6

第三章 实验结果及讨论 7

3.1凝胶法除盐的结果 7

3.1.1凝胶法除盐后FPLC色谱图 7

3.1.2凝胶法除盐后HPLC色谱图分析 8

3.1.3凝胶法除盐反应液1(内含磷酸盐溶液)在不同条件下回收率的测定 9

3.2固相萃取法除盐的结果 10

3.2.1固相萃取法除盐后洗脱液在HPLC色谱图分析 10

3.2.2固相萃取法除盐样品不同条件下回收率的测定 11

3.2.3方法稳定性 14

第四章 结论与展望 15

4.1结论 15

4.2展望 16

参考文献 17

致谢 18

第一章 文献综述

1．1生物活性多肽及其作用和发展

1.1.1肽与生物活性多肽

肽是由两个或两个以上的氨基酸以肽键相连的化合物，在人体内起重要生理作用，发挥生理功能，具有活性的多肽称为活性肽，又称生物活性多肽^[1]。

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