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摘 要

从校内及校外采集六份土壤样品用于提取土样中的芽孢杆菌，最终得到19种菌落形态有差异的菌株。另外实验室中已有58种芽孢杆菌，因此对共计77（58 19）种菌种进行筛选。采用对峙生长法，分析这77种芽孢杆菌对植物病原菌的抑菌作用。挑选出抑菌作用较好的芽孢杆菌进行染色，观察菌类形态特征，并用紫外分光光度计测定菌液OD值。然后对照已知芽孢杆菌特征对其进行分类。主要结论如下：

芽孢杆菌为阳性菌，并且对病原菌具有一定的拮抗作用，实验证明，发酵液的pH或温度对于其抑菌效果也有一定的影响。选择合适的芽孢杆菌可以有效提高生物防治的效果。

关键词： 芽孢杆菌 拮抗作用 植物病原菌 筛选 鉴定

Isolation,Screening and Identification of Bio-control strains of

Bacillus spp.

Abstract

We got six soil samples and use them to extract the bacillus, finally we get 19 strains which have different colony morphology.Laboratory has 58 kinds of bacillus, totally we have 77 (58 19) strains for screening.We use confrontation growth method to analysis the 77 kinds of bacillus which have bacteriostasis to plant pathogenic bacteria.Pick out the bacillus which has great bacteriostatic action,then dye the bacillus, observe the mold shape characteristic, use ultraviolet spectrophotometer to get microbial OD value .Then classify the bacillus by comparing the known bacillus features .Main conclusions are as follows:
bacillus are positive bacteria and have effects on resisting plant pathogenic bacteria. Experiments show that the fermented liquid under different PH or temperature affect the bacteriostatic action. So choose the appropriate bacillus can effectively improve the effect of biological control.

Keywords:Bacillus spp; antagonism; plant pathogenic; filter; Identification

目 录

摘 要 II

Abstract III

目 录 IV

第一章文献综述 1

1. 1生物防治 1

1.2芽孢杆菌 2

1.3生防芽孢杆菌的抗菌机制 2

1.3.1分泌抗菌物质 3

1.3.2竞争作用 5

1.3.3溶菌作用 6

1.3.4诱导抗性作用 6

1.3.5促生作用 7

1.4实际应用中的问题及对策 7

1.4.1目前实际应用中存在的问题 7

1.4.2可以采取的措施 7

1.5生防芽孢杆菌的应用前景 8

1.6 本文研究目的 8

1.7 本文研究特色 9

1.8 本文研究内容 9

第二章 材料与方法 10

2.1 样品采集与培养 10

2.1.1采集 10

2.1.2培养 10

2.2 培养基配制 11

2.3 病原菌的选择 11

2.4 筛选过程 11

2.5 鉴定过程 13

2.6 革兰氏染色 13

2.7 温度的影响 14

2.8 PH的影响 14

2.9 生长曲线测定 15

第三章 实验结果及分析 16

3.1筛选结果 16

3.2鉴定结果 22

3.3革兰氏染色结果 22

3.4 温度的影响结果 23

3.5 pH的影响结果 23

3.6 生长曲线分析 24

第四章结论与展望 26

4.1结论 26

4.2展望 26

参考文献 27

致谢 29

第一章文献综述

在生物灾害的防治中，芽孢杆菌由于其耐受性强，抗菌作用明显而受到广泛关注和应用。生物学家们逐渐掌握其作用机制，其中尤其以枯草芽孢杆菌制剂在实际生产中应用广泛。通过基因选育等技术，挑选出活性较强，具有特定功能的菌种，应用于工农业生产，有效降低化学制剂带来的负面影响。有益芽孢杆菌的研究和利用，必将更好的保护环境。

目前世界各国都在积极研究芽孢杆菌在生物防治中的实际应用，其中美国作为科技强国，率先研发出4株枯草芽孢杆菌的生防菌株并已经得到其环保部门的生产应用许可^[1]。其他国家，如日本，英国等国家也在积极开展对芽孢杆菌的研究和应用。我国在生防芽孢杆菌的生防应用方面也走在国际前列，例如，市面上已经出现并加以应用的微生物农药“百抗”其主要有效成分就是枯草芽孢杆菌B908^[2]。其他已经被开发并且进入实际生产应用的微生物制剂还有亚宝，麦丰宁以及纹曲宁等^[3]。伴随着这些微生物制剂的广泛使用，人类对土壤的破坏程度必将减少，真正能实现绿色生产。

1. 1生物防治

植物会由于某些病原菌导致产量大减，甚至枯死。实际生产生活中，大量应用化学农药虽然能够有一定的效果，但是伴随着农药等一系列化学物质的广泛使用，使得土地及农作物受到巨大的毒害作用。这些化学物质会严重污染土壤，大气和水体，有些甚至能残留在农作物中威胁人类的身体健康。因此开发低污染，绿色环保的生物防治方法显得尤为重要^[4]。目前应对植物灾害,人们通过实践得到的较为有效且环保的方法是利用生物之间的相互关系进行防治。生物防治主要是运用不同物种之间存在的彼此克制的关系，进行灭杀有害生物的方法^[5]。生物防治又具有不同研究方向，大致可以分为：1.以虫治虫 ；2.以鸟治虫； 3.以菌治虫。其中在微生物领域，利用具有抑菌作用的微生物或能产生抑菌物质的生物来抑制植物病原菌的生长是目前广泛研究的课题之一。生物防治可以避免化学物质的大量使用所带来的一系列负面的影响，因而具有广阔的发展和运用前景，受

到专家学者们的广泛重视。生物防治以生态学为基础，综合了分子生物学，细胞学，生物化学，发酵工程，基因学等学科^[6]，知识面广，所学内容较多，一直以来具有较大难度且受到广泛的关注。土壤作为细菌最为活跃的场所之一，生存着各种各样的微生物，从土壤中筛选高效且稳定的拮抗菌株可以促进我们对生物防治的理解和利用。更好的服务于农业生产。

1.2芽孢杆菌

经实验证明，芽孢杆菌是一种具有较大体积的革兰氏阳性细菌，繁殖速度快，通常四小时便能繁殖6倍；生命力强，具有一定的耐高温，耐酸碱的性质，试验中通常将土样放置在80℃水浴锅15分钟后进行提取芽孢杆菌；同时还具有一定的耐低氧，耐高氧性质。芽孢杆菌分类较多，其中应用广泛且广为人知的有苏云金芽孢杆菌，该菌株可以用于植物保护，灭杀害虫；枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌则可用于畜牧水产饲料的添加剂，可用于净化水质；多粘类芽孢杆菌则具有一定的固氮能力，也被广泛应用。

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