论文总字数：17122字

摘 要

本实验以白芨种荚为试验材料，以MS为基本培养基，应用正交试验方法设计植物生长调节剂组合及其浓度配比，建立白芨胚性愈伤诱导体系。并对诱导得到的白芨胚性愈伤进行增殖研究。结果表明：2,4-D 和6-BA激素组合可以明显提高白芨愈伤组织的诱导与增殖效果。且2,4-D是白芨胚性愈伤的主要诱导因子，当2,4-D浓度达到2.0 mg/L时，愈伤组织的诱导率最高。6-BA可以提高愈伤组织的质量，最佳6-BA浓度为1 mg/L。白芨胚性愈伤的最佳诱导培养基为：MS 1.0 mg/L 6-BA 2.0 mg/L 2,4-D 20 g/L 蔗糖 6.5 g/L琼脂，pH值 5.8 ; 最佳增殖培养基为：MS 1.0 mg/L 6-BA 0.2 mg/L 2,4-D 20 g/L 蔗糖 6.5 g/L琼脂，pH 值5.8; 比较三种不同培养方式后，得出白芨胚性愈伤的最佳培养方式为间歇浸没式生物反应器培养。

关键词：白芨；胚性愈伤；2,4-D；6-BA; 间歇浸没式生物反应器

Induction and TIBs proliferation of Bletilla striata callus

Abstract

In this experiment, the bark of Bletilla striata striiformis was used as the experimental material, and MS was used as the basic medium. Orthogonal test method was used to design the plant growth regulator and the concentration ratio. And the callus of bletilla was induced by TIBs. The results showed that when the concentration of 2,4-D reached 2 mg / L, the callus induction rate was the highest. 2,4-D was the main inducing element of embryogenic callus. 6-BA can improve the quality of callus and the best 6-BA concentration was 1 mg / L. Therefore, the optimum medium for callus induction was: MS 1.0 mg / L 6-BA 2.0 mg / L 2,4-D 20 g / L sucrose 6.5 g / L agar pH 5.8.And the best medium for callus proliferation was: MS 1.0 mg / L 6-BA 0.6 mg / L 2,4-D 20 g / L sucrose 6.5 g / L agar pH 5.8.Compared to other traditional culture menthods,TIBs has a great advantage.

Key words：Bletilla striata; callus; 2,4-D; 6-BA; Temporary Immersion Bioreactors(TIBs)

目录

摘要 II

Abstract II

第一章 文献综述 3

1.1白芨概述 3

1.1.1白芨的简介 3

1.1.2白芨的药用化学成分 3

1.1.3白芨的药理作用 4

1.2药用植物细胞培养的研究现状 5

1.2.1药用植物细胞培养的必要性 5

1.2.2药用植物细胞培养技术的影响因素 5

1.3植物生物反应器在组培中的应用 6

1.3.1植物生物反应器简介 6

1.3.2 药用植物细胞生物反应器培养的应用 6

1.4 小结 7

第二章实验材料与方法 8

2.1实验材料 8

2.1.1 采样 8

2.1.2 实验试剂 8

2.1.3试验仪器 8

2.2试验方法 8

2.2.1 表面消毒 8

2.2.2多糖含量测定 8

2.2.3白芨胚性愈伤组织诱导优化 9

2.2.4不同2,4-D浓度对白芨胚性愈伤组织增殖的影响 9

2.2.5培养方式对白芨胚性愈伤组织增殖的影响 9

第三章 实验结果与分析 11

3.1白芨胚性愈伤诱导优化 11

3.1.1 2,4-D、NAA、6-BA三因素三水平对白芨胚性愈伤组织诱导的影响结果 11

3.1.2 NAA和6-BA两种激素配比对白芨胚性愈伤组织诱导的影响....................................................................................................................13

3.2 2,4-D浓度对白芨胚性愈伤增殖的影响 15

3.3不同培养方式对白芨胚性愈伤增殖的影响 17

第四章 总结与展望 19

4.1 总结 19

4.2 展望 19

参考文献 20

致谢 23

第一章 文献综述

1.1白芨概述

1.1.1白芨的简介

白芨(Bletilla striata)又名羊角七、连及草等，是兰科白芨属多年生草本植物^[1]，在《神农本草经》中早有记载 ^[2]。由于白芨的根部呈白色，根系之间连及而生，相互穿插缠绕，故李时珍将其命名为白芨。白芨主要生长于山野之间，尤其喜欢在生长在温暖和湿润的腐殖土和沙土之中，在寒冷地带无法生长，因此白芨广泛分布于江苏、浙江、四川等长江流域及其以南地区。白芨果荚成熟后会呈现出深棕色的橄榄形状，其中包裹着浅棕色、细小至粉末状的白芨种子。种皮为半透明的单层细胞组成，具有高度分化能力，且不具有胚乳为其提供营养成分。上述性状使得白芨种子很难在自然条件下萌发和生长^[3]，导致生产量很低，又由于中医药事业的蓬勃发展，白芨的市场需求量在不断地扩大，这导致野生白芨被采挖过度^[4-5]，野生白芨的数量大大下降，处于濒临灭绝的境地，现已被列为国家濒危保护的野生药用植物之一^[6-7]。

1.1.2白芨的药用化学成分

白芨是一味传统且功效极高的药用植物，主治咳血吐血，疮疡肿毒、外伤出血、皮肤皲裂、肺结核咳血和溃疡病出血等^[8]。国内外学者对白芨的多种化合物成分及其药理作用做出了详细的研究，据文献报道，白芨主要的化学成分是多糖、联苄类和菲类及其衍生物，如DL-丁香树脂酚、植物甾醇、五倍子酸等^[9]。

白芨多糖是一种天然高分子粘性多糖，具有促进骨髓细胞增殖的功能，随着骨髓细胞数量的增加，提高了促进骨髓造血的能力^[10]。同时在进行动物试验的过程中，发现白芨多糖具有促进小鼠肠粘膜修复的功能，主要功效是通过抑制炎症的发生，使小鼠恢复免疫平衡，从而使实验性动物溃疡性结肠炎症状得以好转^[11]。联苄类化合物是一类具有1,2-二苯乙烷母核的天然产物及其聚合物的统称，具有多种生物活性，例如植物生长调节活性、抗菌活性、抗病毒能力、抗氧化能力以及细胞毒活性等^[12]。二氢菲类化合物是白芨的假鳞茎中提取到的最多的化学成分^[13]。其主要的化学结构是4,7-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲、4,7-二羟基-对-羟苄基-2-甲氧基-9,10-二氢菲等。联菲类化合物主要分成白芨联菲醇类^[14]和白芨联菲类^[15]，主要包括4,4'－二甲氧基－9,9',10,10'－四氢－2，2',7，7'－四羟基－1,1’－联菲。

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