论文总字数：15827字

摘 要

吉非替尼（Gefitinib）作为第一代表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）在非小细胞肺癌（NSCLC）的临床应用上非常广泛。它是一类苯胺衍生物，通过选择性的抑制受体酪氨酸激酶，以抑制剂蛋白质磷酸化，从而治疗局部或转移性非小细胞肺癌。本文以转基因斑马鱼Tg（fabp10a: dsRed; ela3l: EGFP）为研究对象，研究了吉非替尼对斑马鱼胚胎肝脏毒性的影响。

本实验采用吉非替尼高、中、低剂量组，以肝脏面积减少、肝脏的荧光强度，相关肝酶如天冬氨酸转氨酶（AST），丙氨酸转氨酶（ALT）等的活性为肝毒判定标准，研究吉非替尼对斑马鱼胚胎胚胎的肝脏造成的毒性。结果显示吉非替尼造成的肝脏毒性和给药浓度成正相关。通过体视显微镜观察斑马鱼胚胎的肝脏病理学切片，发现肝脏细胞凋亡、核萎缩程度以及细胞炎症现象都随着吉非替尼给药剂量的增加而严重，表明斑马鱼胚胎肝毒性呈剂量依赖性。通过RT-qPCR实验，我们也可以得到一些关于吉非替尼造成斑马鱼胚胎肝脏毒性的分子机制，如通过上调凋亡基因bax来调控肝脏细胞的凋亡。

关键词：吉非替尼 酪氨酸激酶抑制剂 肝毒性 斑马鱼 给药浓度

Hepatotoxicity of Tyrosine Kinase Inhibitor Gefitinib on Zebrafish Embryo

Abstract

Gefitinib belongs to the first generation of tyrosine kinase inhibitors, it is widely used in the treatment of lung cancer, but there are many reports that it will cause liver toxicity,and their potential liver toxicity is well known less. Gefitinib is a class of aniline derivatives. It can inhibit protein phosphorylation by selectively inhibiting receptor tyrosine kinase, thereby treating local or metastatic non-small cell lung cancer. In this paper, the transgenic zebrafish Tg（fabp10a: dsRed; ela3l: EGFP） was used as the research object to study the effect of gefitinib on the developmental toxicity of zebrafish embryos.

In this paper, the survival rate of zebrafish embryos is evaluated by the dosage of the drug. The liver area reduction, fluorescence intensity, aspartate aminotransferase (AST), and alanine aminotransferase (ALT) levels are used as the criteria for liver toxicity. The toxicity of Gefitinib to the liver of zebrafish embryos showed that the liver toxicity was positively correlated with the administered concentration. Observing the pathological slices of zebrafish embryos through a stereo microscope, it was found that the death area of liver tissue increased with the increase of gefitinib concentration, indicating that the drug solution gradually increased liver toxicity to zebrafish embryos. The results of this paper provide data support for the follow-up experiment to find a suitable liver protective agent for liver damage caused by tyrosine kinase inhibitors, and ensure the safety of patients' medication.

Key Words: Gefitinib;Tyrosine kinase inhibitor; Hepatotoxicity; Zebrafish;Administration concentration

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 斑马鱼在药物研发中的应用 1

1.1.1模式脊椎动物斑马鱼的特点 1

1.1.2 斑马鱼在药物研发中的应用过程 2

1.2 吉非替尼的抗肿瘤机理及研究进展 2

1.2.1吉非替尼的理化性质及抗肿瘤作用 2

1.2.2 吉非替尼的药理活性和药代动力学特征 3

1.3吉非替尼的药物性肝损伤 3

1.3.1药物性肝损伤 3

1.3.2吉非替尼的肝脏毒性 4

1.4 实验目的与意义 4

第二章 实验方法及实验手段 6

2.1 实验材料和方法 6

2.1.1 吉非替尼溶液配制 6

2.1.2 斑马鱼 6

2.2实验方法 7

2.2.1药物治疗 7

2.2.2 吉非替尼对斑马鱼胚胎存活和发育的影响 7

2.2.3 斑马鱼胚胎的肝脏 7

2.2.4 斑马鱼的肝脏组织病理学评估 7

2.2.5 吖啶橙染色 7

2.2.6生物化学分析 8

2.2.7 实时定量PCR 8

2.2.8 统计分析 9

第三章 结果与讨论 10

3.1 实验结果 10

3.1.1 吉非替尼对斑马鱼胚胎生存率的影响 10

3.1.2 吉非替尼对斑马鱼胚胎肝脏形态的影响 10

3.1.3 吉非替尼引起的斑马鱼胚胎的组织学变化 12

3.1.4 生化分析 13

3.1.5 吉非替尼对斑马鱼胚胎肝脏转氨酶水平和氧化应激的影响 13

3.2 讨论 15

第四章 总结与展望 16

4.1 总结 16

4.2 展望 16

参考文献 17

致谢 19

文献综述

1.1 斑马鱼在药物研发中的应用

1.1.1模式脊椎动物斑马鱼的特点

斑马鱼（（图1-1））与人类基因具有高度同源性（85%）^[2]，是FDA认可用于药物活性筛选、毒性评价的动物模型^[3]。它具有生长快，胚胎透明，易于在体外（in vivo）观察的特点，能够以微量滴定板形式筛选含有少量（单毫克）化合物的整个生物体，尤其是对人类的高度遗传保护提供了优于传统体内动物模型的其他优势^[4]，并且斑马鱼实验周期短，时间可以小于1周，是目前唯一有望实现实时指导个体化用药的动物模型（与小鼠模型比较）^[5]。斑马鱼有着顽强的生命力，近年来已在人类疾病和毒理学研究中被更广泛地接受。斑马鱼胚胎没有外部能量供应，它的卵黄被消耗以维持发育和运动，包括新陈代谢的肝功能。

图1-1 斑马鱼模型

请支付后下载全文，论文总字数：15827字